[医药卫生]在基因水平诊断疾病.ppt

Gene Diagnosis 基因诊断的基本概念 第一节 基因诊断的基础 基因诊断的特点 1．属于“病因诊断”，针对性和特异性强。 2．特异性和灵敏度高，微量标本即可进行诊断。 3．检测标本适应性广 。 4．诊断感染性疾病早期、快速 1. Directly Detection: known abnormal gene dot mutation deletion insertion 2. Indirectly Detection: unknown abnormal gene DNA marker DNA polymorphism Linkage analysis 为适应DNA诊断的需要，除上述常规PCR外，又逐步发展了不同目的特殊类型的PCR技术： （1）??? 长片段PCR（long fragment PCR） （2）??? 锚定PCR（anchored PCR） （3）??? 嵌套式PCR（nesting PCR） （4）??? 多重PCR（multiplex PCR） （5） 多重等位基因PCR（multiplex allele PCR） （6）??? 不对称PCR（asymmertric PCR） （7）??? 反向PCR（inverse PCR） （8）??? 原位PCR（in situ PCR） （9）??? 定量PCR（quantitative PCR） (10) 逆转录PCR（reverse transcription PCR，RT-PCR） 四、基因芯片（gene chip） 生物芯片(biochip) 应用微电子工业加工工艺，在玻璃、塑料、硅片等材 料上加工出用于生物样品分离、反应或分析的微细结构。 目前主要有两大类： 1. 生物活性微阵列 (bioactive microarray) 2. 基因芯片 (gene chip), DNA微阵列 (DNA microarray) （一）基因突变的直接检测 检测是否存在已知的突变。适用于对发病具有直接因果关系的致病基因已明确，对致病基因的序列结构已完全或部分了解，分子机制已完全或部分清楚者。 常用方法： 1. 限制性酶切片段分析法 适用于基因内的较大片段或位于酶切位点上的点突变 2. 寡核苷酸探针斑点印迹杂交分析法。 适用于检测各种点突变，特别是不在酶切位点上的点突变。 1、限制性酶切图谱直接分析法 导致某一限制酶识别位点 移位的大片段缺失或插入， 导致某一限制酶识别位点 丧失或获得的点突变， 均可引起相应限制性片段 的长度和数量发生变化。 分析限制性酶切图，即可 诊断出此类突变。 （1）导致某一限制性位点丧失或获得的点突变 镰状细胞贫血：b-珠蛋白基因第六密码子 GAG(Glu) →GTG(Val) MstII CCTNAGG bA CCT GAG GAG 1.15kb 0.2 ? bS CCT GTG GAG 1.35kb ? （2）导致某一限制性位点移位的大片段缺失或插入 b-地中海贫血：b-珠蛋白基因3末端缺失0.6kb | | BgI II BgI II 5.2kb | |