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激光扫描共聚焦显微镜 技术在生物学中的应用 1 主 要 内 容 第一部分 光学显微镜基础知识 第二部分 激光共聚焦显微镜技术 第三部分 图像改进技术（补充） 2 第一部分 光学显微镜基础知识 第一节 发展历史 第二节 成像原理 第三节 主要技术参数 主要技术参数 第四节 光学显微镜的基本组成结构 第五节 光学显微镜的调节 第六节 光学显微镜的使用与维护 3 第一节 光学显微镜的发展历史 1590年，荷兰的眼镜制造者造出类似显微镜的放大仪器。 1610前后，意大利的伽利略和德国的开普勒改变物镜 和目镜之间的距离，得出合理的显 微镜光路结构 1665年虎克在显微镜中加入粗动和微动调焦机构、照明系统和承载标本片的工作台，这 些部件经过不断改进，成为现代显微镜的基本组成部分。 1673～1677年期间列文胡克制成单组元放大镜式的高倍显微镜 1684年惠更斯制造出双透镜目镜：惠更斯目镜 19世纪高质量消色差浸液物镜的出现，使显微镜观察微细结构的能力大为提高，19世纪 70年代阿贝提出显微镜的完整理论 1850年出现了偏光显微术；1893年出现了干涉显微术 1902年艾夫斯建立了双目镜系统 1935年泽尼克发现了相衬原理，并因此获得诺贝尔奖 20世纪60年代微分干涉衬显微镜问世 20世纪80年代共焦激光扫描显微镜开始应用 主要的显微镜厂家主要有：奥林巴斯、蔡司、徕卡、尼康 4 光学显微镜的分类 光学显微镜有多种分类方法： •按使用目镜的数目可分为双目和单目显微镜； •按图像是否有立体感可分为立体视觉和非立体视觉显微镜； •按观察对像可分为生物和金相显微镜等； •按光学原理可分为偏光、相衬和微差干涉相差显微镜等； •按光源类型可分为普通光、荧光、紫外光、红外光和激光显微镜等； •按接收器类型可分为目视、数码（摄像）显微镜等； •常用的显微镜有双目体视显微镜、偏光显微镜、荧光显微镜和激光显微镜等。 5 第二节 显微镜的成像原理 一、基本光学原理 （一）折射和折射率 光的折射现象 折射率（反映介质的光学性质 ） n=sini/sin r i是光线在真空中与法线之间的夹角． r是光线在介质中与法线之间的夹角 （二） 透镜的性能 凸透镜可以会聚光线，凹透镜可以发散光线 （三）凸透镜的五种成象规律 二、 显微镜成像（几何成像）原理 实像 虚像 物镜成象：利用物体在凸透镜一倍焦距以外二倍焦距以内，成倒立大的实象。 目镜成象：是利用物体在凸透镜一倍焦距以内，成正立的放大的虚象。 6 显微镜成像原理 被观察的物体AB放在 物镜的焦距以外、靠近