[理学]BP_chapter8 共聚焦激光扫描荧光显微镜.pptVIP

共聚焦激光扫描（荧光）显微镜 　激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope LSCM)是20世纪80年代发展起来的一项具有划时代意义的高科技新产品，是当今世界最先进的细胞生物学分析仪器。激光共聚焦显微镜利用激光作为光源，在传统光学显微镜基础上采用共轭聚焦的原理和装置，以及通过针孔的选择和PMT的收集，并带有一套对其所观察到的对象进行数字图像分析处理的系统软件。与传统光学显微镜相比，它具有更高的分辨率，实现多重荧光的同时观察并可形成清晰的三维图象等优点。所以它问世以来在生物学的研究领域中得到了广泛应用。 共聚焦激光扫描显微镜 共聚焦激光扫描显微镜(Confocal Laser Scanning Microscope ,CLSM) 是1987年面世并发展起来的一种先进的细胞生物学分析仪器,是一项具有划时代意义的高科技新产品,是近代生物医学图像分析仪器最重要的发展之一,有细胞“CT”之称。成为形态学、分子细胞生物学、神经科学、药理学、遗传学等领域中新一代较有力的研究工具。 共聚焦显微镜的优点 减少由于光散射产生的图像模糊 增加有效分辨率 提高信噪比 厚标本的清楚细查 Z轴扫描 可以实现数字放大倍率的调节 色素痣 皮肤影像学 内窥式激光共聚焦显微镜 光学低相干层析成像（OCT） 背景 生物医学光子学是光学与生命科学相互交叉、相互渗透的一个边缘学科，是关于光辐射与生物组织之间相互作用的学问。 光学技术在生物医学中应用由来已久，早在17世纪，光学显微镜的发明将医学研究提高到细胞形态学水平。 二十世纪七十年代之后，激光技术已成为临床治疗的有效手段：激光诊断(以激光作为信息载体) 激光纤维内窥镜；激光扫描共焦显微镜；激光多普勒血流计；激光光谱诊断技术； 激光治疗(以激光作为能量载体)光动力疗法治癌；激光外科手术；准分子激光角膜成形术；等 简介 发展历史 光学低相干反射测量技术（OLCR）OLCR最早形成于七十年代，它利用低相干光干涉原理测量反射光的幅度和相对相位，从而获取传输介质的内部信息。 用途：集成光纤器件的特征或瑕疵检测。 光学相干层析成像技术的优点 1)无辐射损伤、非侵入性 与X射线、核磁共振（MRI）等有损层析成像技术相比，OCT具有无比的优越性。 2)高灵敏度 由于引入了外差探测，其探测灵敏度远远高于直接探测。典型的OCT系统可达到90dB~100dB的探测灵敏度，能够探测来自高散射生物组织2~3mm深度的光学信号，例如：浅表皮肤。 3)高分辨率 OCT图像的轴向分辨率和横向分辨率互不相关，它能提供独立于横向分辨率的近似于微米量级（1～10μm）的轴向分辨率。 4)结构简单、成本低廉 OCT成像装置的核心是迈克尔逊干涉仪，成像原理简单，制造成本相对较低，各种光学器件和检测设备易于在市场中购买。 OCT在医学诊断领域的主要应用 OCT技术在眼科疾病、牙科疾病、心血管疾病、内腔肠胃道疾病、皮肤癌的早期诊断以及胚胎发育生物学等研究中，都具有重要的应用价值： 眼科检查 皮肤烧伤检查 内腔活检 眼科检查：利用OCT技术，可用于眼底视网膜在微观解剖结构上病变的检测，也可用于眼前部角膜、虹膜、晶状体等组织的检测或参数测量。它是青光眼、糖尿病水肿等视网膜疾病早期诊断的有效工具。 内腔活检：OCT结合内窥镜，可以将检测范围拓宽到体腔内部的呼吸道、消化道、泌尿系统以及心血管系统等，实施活体无损的高分辨率截面成像。 时域OCT的成像原理 OCT的空间分辨率 时域光纤OCT 关键技术要点 光学延迟线在光学领域应用广泛、类型繁多，在OCT系统中应用的类型主要包括以下四种： 1. 利用反射器线性平移的光学延迟线； 2. 利用旋转方法的光学延迟线； 3. 利用光纤拉伸的光学延迟线； 4. 基于频域光学脉冲整形技术的快速扫描光学延迟线。 为克服微弱干涉信号给检测带来的难度，OCT系统通常采用固定频移法来产生外差信号，实现外差探测。 光外差探测技术是一种高精度的测量技术，它将包含有被测信息的相干调制光波和作为基准的本机振荡光波，在满足波前匹配条件下在光电探测器上进行光学混频。探测器响应的输出是频率为二光波光频差的拍频信号，该信号包含有被调制信号的振幅、频率和相位特征。 数据采集与处理 心脏血管 OCT还可以在制药、工业测量等领域中得到应用。 感光性树脂 以迈克尔逊干涉仪为核心，利用光源的低相干特性，当参考臂和样品臂的光程匹配时（光程差在一个相干长度范围内），才能产生干涉条纹 通过测量背向散射光来反映组织内部折射率的非连续性变化，干涉条纹的幅度与背向散射光的强度成正比 深度分辨率 = 光源的相干长度 横向分辨率 = 聚焦光斑的大小 (1 – 10 microns)