应用TaqMan荧光定量聚合酶链反应技术检测鼠疫-中华流行病学杂志.PDF

生里堑!j堑兰鲨查!!堕至!旦篓垄堂箜!塑坚!一!J_曼￡些m“，1：垒!g!壁!!堕!!型蔓!，堕!．! 613 ·实验研究· 应用TaqMan荧光定量聚合酶链反应技术 检测鼠疫耶尔森菌 李伟海荣俞东征张志凯蔡虹 【摘要】 目的发展种快速、敏感、特异的枪测鼠疫耶尔森菌方法。方法应用荧光定量聚合 酶链反应(IxlR)技术，引对pMTl质粒上的ca，1基崮，pPcP]质粒上的纠a基因，染色体上的与色素 沉着相关的^川基因和侵袭素z””基因设计raqMall引物探针，进行荧光定量PcR检验，评价方法 的特异性、敏感性；构造并应用上述引物探针的外标对照定量；构造pla的内标对照，采用多重荧光定 量PcR(FAM，VIc荧光检测)，发现假阴性；采用UDG抗污染、R()x参照荧光染料矫正背景噪音，提 高检验能力；榆验模拟鼠疫耶尔森菌强毒株和Ev菌感染的动物脾脏器样本，评价该法住实际工作的 府用。结果设引的引物、探针特异性良好，pIa、fl、hn、s指标的敏感性分驯是最低检出f0拷贝、l拷 贝、l拷贝。结论该方法能快速、灵敏、特异植出鼠疫耶尔森蒲，对鼠疫监铡、预防生物恐怖等方面 具有重要意义。 f关键词】 鼠疫耶尔森菌；实时荧光聚台酶链反应；定量分析 Establishmentand fluor鹤cence reactionbased0nthe applicati衄“real—timep0Iymera转chain TaqM姐 detectionof prohes“r L』W矗，HHj y唧fH缸P盱m R。ng，yUD()n千幽删g，Z兄4NG劢p^d2，cAf nnd mngi埘!￡H弛斯勖m?}l㈣幽ku㈣sF岛眦mld越Pre雠ttⅫn．Ch!㈣(hter虹Dt靶Ⅱ瓣coniⅢ0 P，Tw月f幻N，BP谢”F102206，Chlna ＆rr黝扣相zHg＆眦h07：YU I)。”}靠e“g I Abstract】 and meThods and*nsmved虬ection ObjectiveFstabl曲lngdevelupi“g f(”qulck，speclal rea㈨me UsLng fluore州ncep0Ivmerasech8lⅡreaction(PCR) of托rsiHt“p“ns(y蛳fzs)Methods bas—on wlthLmGann∞ntamlTlat【onandROXrefere眦e esta“shed TaqMantechnokgy systenls dye，we a nlerhodto Pmbesand were An pnnlers detect¨声“￡zs fronl户如，m，1，^7n㈨dz”。gene deslgned Int帆al c011trdwasaddcd吣thereactLonmlxtl】rc㈣r(ierLudetectthe ofP(jRLnhibi【0rs p州lnve prescnce thaLwereofTenfound1n se^al 0f wasevaluated dilutioncolons，imernal b10l()glcalsampI郫‰s1Llvi‘y by s啪Lns wasconfLmled T)NAs