检测循环肿瘤细胞及其分子标记的研究进展-探索生物科技有限公司.PDF

檢測循環腫瘤細胞及其分子標記的研究進展 從腫瘤原發部位脫落並進入血液循環系統的細胞稱為循環腫瘤細胞(CTC)，該細胞被認為是導致腫瘤 遠端轉移發生的必要前提，其精準計數以及分子標記對於腫瘤患者的癒後判斷、療效評估均有重要的 指標作用。CellSearch系統是目前唯一通過美國FDA認證的CTCs檢測技術，較少受人為影響因素干 擾，能夠達到CTCs的半自動化檢測，並具有精準性與可重複性。 研究發現，腫瘤發生時多為器官侷限性疾病，但最終幾乎都會通過血流傳播到遠端器官，形成轉移， 這種遠端轉移是導致腫瘤患者死亡的主要原因。腫瘤遠端轉移的發生包括局部浸潤、滲入血管、隨血 液循環系統轉移並在其中存活、移出血管、最後在新的部位停下來增生成新的腫瘤。 進入到血液循環系統的腫瘤細胞被稱為循環腫瘤細胞 (circulating tumor cells, CTSs)，它是遠端轉 移發生的必要前提。目前CTCs的檢測方法有很多種，包括: 細胞大小分離法、免疫磁株分選法、密度 梯度離心法，而後續的分析方法也有很多種，包括: 免疫螢光技術、反轉錄-聚合酶鏈反應法、流式細 胞分析、基因晶片等。上述方法各具優勢，但最大的不足在於無法實現標準化檢測，且受試劑成分、 操作步驟、判讀流程等多種因素的影響，同樣的樣品的重複檢測結果很容易出現偏差。CellSearch系 統是目前自動化程度最高的CTCs檢測技術，受人為因素的影响較小，該系統採用免疫磁珠分選技術 與免疫螢光分析技術，具有高的特異性與可重複性。該系統是目前唯一被美國食品與藥品管理局 (FDA) 批准用於轉移性乳腺癌、結直腸癌、前列腺癌等癌症CTCs檢測的新技術。近年來，應用該系 統檢測肺癌及其他Solid tumor的研究也越來越受重視，而且通過該系統分析CTCs分子標記的研究也 漸逐步發展。 CellSearch系統的組成和檢測原理 CellSearch系統由CellSave儲存管、Autoprep系統、Analyser系統以及配套的試劑等所組成。 CellSave儲存管內裝有特定的細胞保護劑，能夠幫助提高分析的可再現性和可靠性，同時確保CTCs 能夠在室溫條件下穩定保存長達96小時，適合樣品的運輸。Autoprep系統具有全程質量控制系統， 結合CTCs專用的檢測試劑盒，能夠實現複雜樣本處理的自動化和標準化，最大限度地減少了操作時 間和程序。Analyser系統是一種半自動螢光光學系統，可自動對分選的CTCs進行拍照、分析、和計 數，最終必須由經過原廠受訓認證的人員對螢光圖像進行最後的分類與判讀。 CellSearch系統試劑的主要組成分包括: 上皮黏附蛋白(EpCAM)免疫磁株、細胞固定試劑、螢光標記 試劑以及緩衝液等。在Autoprep系統中，相應的試劑將會自動按步驟加入，首先是通過EpCAM補 獲(capture)CTCs細胞，將補獲富集的細胞固定後，儀器會自動加入螢光抗體進行標記。 探索生物科技公司 Tel. 02 .tw 1 所使用的螢光標記抗體包括PE標記的細胞角蛋白(CK)，含CK8、CK18和CK19，以及APC標記的 CD45。此外，試劑中還有DAPI，專門用於細胞核的染色。固定並染色的細胞在Analyzer系統中進 行四通道的掃描分析，系統將會自動篩選CK陽性的事件供檢測判讀，符合腫瘤細胞型態且 ”CK、 DAPI、CD45空白”，會被定義為CTCs。 7.5 ml blood from Cell Save Tube + Buffer centrifuge CellSave 採血管: 用於收集並儲存 取7.5ml血及6.5ml緩衝液放入離心 Celltracks Autoprep: 自動對CTCs 周邊靜脈血液 管離心 進行補獲和染色，可同時對8個樣本