微流控进样阿达玛变换显微荧光成像单细胞分析-中国显微图像网.PDF

第# 卷 分析化学 （CD(EF *G)EGD ）! 研究报告 第4 期 ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! $$ 年4 月 6@=HIJI K3LMHAN 3O )HANPQ=;AN 6@I=JQMP 4%. R 4S, 微流控进样阿达玛变换显微荧光成像单细胞分析 # 李! 涛! 唐宏武 ! 周锦松! 陈观铨 （武汉大学化学与分子科学学院测试中心，武汉#$$% ） 摘! 要! 将微流控芯片用于单细胞进样，以自制阿达玛变换显微荧光成像分析系统进行成像检测，讨论了影 响单细胞进样和荧光成像的主要因素，并对花粉细胞’() 含量进行定量分析。结果表明：微流控进样技术与 *+ 显微成像技术相结合，可有效可靠地应用于单细胞分析中，所测定的三个玉帘花粉的’() 含量分别为 , - 、,#- . 和/ - . 01 。 关键词! 阿达玛变换，微流控芯片，荧光成像，单细胞分析 ! 引 言 微流控芯片的加工制作及其在样品进样分离、单成分检测、567 扩增及’() 测序等领域中的应用， 是一个十分活跃的研究领域。方肇伦等［,， ］以玻璃刻蚀法及高分子材料模塑法制作微流控芯片，并用 来进行氨基酸分离和567 扩增实验，这种芯片加工技术日趋成熟。最近，作者成功研制了高分辨阿达 ［# ， ］ 玛变换（*+ ）显微图像分析系统，并已将其应用于细胞’() 定量分析及肿瘤倍性分析领域 。本实验 根据文献［4 ，/ ］，利用聚甲基丙烯酸甲酯（588) ）片基制作芯片，并利用该芯片为*+ 成像系统提供动 态进样技术，结合前者进样体积小、快速有效及后者高分辨率、高信噪比图像探测能力等特点，以实现单 细胞流动进样及停留成像检测，并对玉帘花粉细胞’() 含量进行分析讨论。 # 实验部分 # - ! 仪器与试剂 阿达玛变换显微图像分析仪（自行研制），其工作原理参见文献［# ， ］。 单细胞悬浮液：将)9 染色的细胞试样振荡分散在4$: 缓冲甘油中，实验前临时配制。 # - # 芯片制作 在588) 基片上相距, ; 处打两个小孔（, ，=- - ），将另一个,4$ ! 厚片基热切两等分，用三氯 甲烷将其相距$$ ! 平行粘贴在基片上的两孔间并盖过小孔，形成一个, ; ? $$ ! ? ,4$ ! 微通道， 再用三氯甲烷封接盖玻片与带微通道的基片，用硅橡胶将小孔两端封严，室温下固化 @ ，备用。 # - $ 分析过程 微流控分析装置如图, 所示。实验时，打开进出口阀，压缩空气，细胞样品液进入微通道内，停止施 压，关上进出口阀，在选定波长下，以*+ 成像系统采集信号，获得细胞*+ 荧光图像。以单细胞总荧光 强度对细胞内荧光标记成分进行定量分析。 $ 结果与讨论 $ - ! 单细胞进样及成像检测能力 芯片通道尺寸、细胞样品液浓度及其在微通道内的流速，是影响单细胞进样的主要因素。实验采用 自制合适通道尺寸的芯片，并配制足够稀的细胞样品溶液，调节进样压力使样品溶液以合适的速度流过 微通道，实现单细胞进样。图 （A ）为# 个)9 标记的玉帘花粉细胞通过检测区时的*+ 透射光图像。 由图可见，在实验条件下，细胞呈单个或单列通过检测区。 在$ ? 物镜下，对图 （A ）中的花粉细胞进行*+ 显微荧光成像，见图 （B ）。结果表明：检测区内 $$#2$/2,$ 收稿；$$#2,2,. 接受 本文系国家自然科学基金资助项目（(3- $$%4$ ,. ） 分 析 化 学 第BA 卷 ?H@ 图! 微流控分析系统装置示意图 #$% ! ’()*+,-$( .$,%/,+ 01 -)* +$(/0123$.$( ,4