脱毒马铃薯组培室的基本情况演示幻灯片.ppt

第六师农科所王 航;组织培养：又叫离体培养,利用细胞全能性，从植物体内分离出符合需要的组织，经过培养以获得再生的完整植株。;为什么马铃薯要脱毒：马铃薯块茎容易积累病毒，用带病毒的块茎当种薯，产量逐年下降，品质降低。容易染病。;一. 基本情况;§1 实验室设置及仪器设备; 1．基本实验室;面积60平方米左右，配备的主要仪器设备有 ：冰箱、天平、微波炉、pH计、培养基灌装器、药品柜、器械柜、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。冰箱以体积200-250L为宜，用于储存培养基母液、激素维生素等贵重药品、彩色胶卷、及保存植物材料。; 配备高压灭菌锅、灭菌锅的选择应根据不同的要求选择不同型号的灭菌锅。一般实验室可选用小型的医用手提式高压灭菌锅，较大的实验室可选用立式自动控制压力和温度的灭菌锅。生产性的实验室可选用大型的卧式灭菌锅。小的10万，大的45万。;;无菌操作室又叫接种室。通常由里外两间组成，外间是缓冲间，用于准备工作，防止污染的作用。缓冲间的门应该与接种室的门错开，两个门也不要同时开启，以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。缓冲间内应该设有洗手池、鞋帽架、和柜子、紫外灯。无菌操作室的内壁应当用塑钢板或瓷砖装修，工作人员进入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。 室内应配有超净工作台，紫外灯、解剖镜、各种接种器械等。 ;（一）、灭菌工作是极其重要的。 首先应建立有菌和无菌的概念有菌的范畴：有菌：凡是暴露在空气中的物体，至少其表面都是有菌的。如植物的表面、超净工作台的台面，未处理的工具和手等。 无菌：高压高温处理（工具、器皿、培养基等）  物理或化学处理；  火烤后的物体； ;1、物理方法：干热、湿热、过滤（0.25微米）紫外灯、超声波等。 2、化学方法：使用灭菌剂或抗菌素，如酒精、次氯酸钠、升汞、漂白粉、高锰酸钾、双氧水、福尔马林等 ;干热灭菌 玻璃器皿、器械 湿热灭菌 培养基、蒸馏水、器械、棉塞等 熏蒸灭菌 接种室、培养室 过滤灭菌 液体培养基、蒸馏水 药剂灭菌 培养材料 烧灼灭菌 器械、瓶口、棉塞、包头纸 辐射灭菌 接种室。培养间;适用于玻璃器皿和金属器械的灭菌。操作方法：150℃ 、40min或120℃ 、120min，如果发现芽孢杆菌，160℃ 、90～120min;适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、纸等。121℃ 维持20～30min注意点：加足水、排尽气、气压降到0时，才能开盖; 培养基的灭菌一般用高压高温处理，但如果培养基中某些成分遇到高温分解（如某些生长调节剂GA3、玉米素等），就需要过滤灭菌。另外酶、血清等也需要过滤灭菌  灭菌方法：将生长调节剂或酶配成一定浓度，用注射器注入微孔滤膜虑，滤膜孔径0.22～0.45微米。制培养基时，现将培养基高压灭菌，待降至50℃左右时，加入适量的激素，然后分装。;主要是利用紫外灯进行照射，适合实验室空气、操作台等，灭菌时间20～30min。注意：关灯后5min后再进入。超净工作台关灯后要打开风机。;用火焰灼烧达到灭菌目的，适用于接种器皿的灭菌。;适用外植体、实验器皿、操作表面、皮肤等。几种常用消毒剂的效果比较;长期不用的培养室或接种室要进行熏蒸。方法：甲醛、高锰酸钾熏蒸。 甲醛的用量通常按每立方米空间2-6毫升计算，高锰酸钾的用量是甲醛的一半。室内准备妥当后，把称好的高锰酸钾放在瓷碗或烧杯内(最好在碗或杯下面铺一张报纸，以利清洗)，然后将甲醛也倒入碗或杯内，立即出屋关门。几秒钟后，甲醛溶液即沸腾挥发。高锰酸钾是一种氧化剂，当它与一部分甲醛作用时，由氧化反应产生的热可使其余的甲醛挥发为气体。;甲醛熏蒸接种室应至少在使用前24小时进行，熏蒸后密闭保持4小时以上再进入室内工作。甲醛对人的眼、鼻有强烈刺激作用。因此，可在使用前用氨进行中和。取与甲醛等量的氨水，倒在另一个烧杯里，迅速放入熏蒸室内，使甲醛和氨水发生中和反应，以消除甲醛味，减少对人体的刺激作用。使用氨水应在工作前2小时进行。 对有材料的培养室，也可以采用乙二醇加热熏蒸;按需消毒空间每立方米用于苍术片(中药店有售)1克计算，将苍术浸泡于95％酒精内，酒精用量以淹没苍术为准，密封浸泡24小时待用。消毒时将浸泡好的苍术置于1个或2个耐高温容器内，点燃熏蒸2小时，每周1次。需要注意的是，开始点燃时有5厘米左右高的火焰，约持续2分钟。因此，需待火焰灭后，观有淡淡的烟雾上升后室内方可离人;人为因素（工作人员本身）：工作服