第五次实验 结核分枝杆菌与其他原核细胞型微生物.ppt

12 遵义医学院 遵义医学院微生物教研室 方法 挑取痰液涂片（厚涂片）干燥 固定 石炭酸复红15分钟（初染） 水洗 3％盐酸酒精 （脱色）水洗 碱性美兰1分钟（复染）水洗 干燥 镜检 材料 牙签 、 生理盐水、玻片 染液 结晶紫、碘液、 95%酒精、 稀释石碳酸复红 方法 1．玻片一张，放生理盐水1-2环，用牙签取牙垢少许与生理盐水混合制成涂片 2．待涂片干后火焰固定, 革兰氏染色, 镜检 多细胞真菌形态 菌落特征: 酵母型菌落 类酵母型菌落 丝状菌落 原理 直接涂片检查 用显微镜直接检查标本中有无菌丝及孢子的存在，对皮肤丝状菌的感染可作初步诊断，本法简单迅速易行。 材料 标本:脚皮等 试剂:10％KOH 其他:玻片、镊子、酒精灯等 方法 KOH透明法 （1）取脚皮少许于玻片上，加二滴10%KoH溶液，覆盖一盖玻片，置火焰上微微加热，以加速角质溶解，使标本透明，然后微微加压，使成薄片，并需驱去气泡，用吸水纸吸去周围溢液，（如为毛发标本，切忌加热加压过甚，以保持毛发原形为宜，便于观察真菌与毛发的关系）显微镜检查。 （2）将已制备的标本片，先用低倍镜检查，然后再用高倍镜证实 支原体 支原体是一类没有细胞壁，呈多形性，能在无生命的培养基中生长繁殖的最小微生物。大小介于细菌和病毒之间。普通染色不易着色，用Giemsa染色着色较浅。革兰染色为阴性。营养要求较高，需要在含10～20%马血清和酵母浸液的培养基上生长。最适的pH7.8 ～ 8.0.生长缓慢,在固体培养基上培养2 ～ 3天后才出现菌落。典型的菌落呈“荷包蛋”状，中心厚边缘薄的菌落形态。菌落表面呈颗粒状 第五次实验课小结 1、抗酸染色的原理、步骤、结果、意义 2、结核杆菌章节的重点内容（特性、PPD试验、相关名词等） 3、螺旋体的分类及各自的特点，尤梅毒螺旋体 第五次实验报告 检查牙垢中螺旋体 结核痰标本抗酸染色 真菌检查法 第六次实验内容 1、病毒组织培养法（录象） 2、血凝试验（1份/组） 3、鸡胚尿囊腔接种（1份/组） 4、观察病毒形态（电镜照片）及包涵体（示教） 5、讲解病毒分离培养及实验总结 观察梅毒螺旋体形态 梅毒螺旋体：Fontana镀银染色，菌体非常细小，弯曲，螺旋状，呈棕褐色，有紧密螺旋。 观察支原体集落 第五次实验 结核分枝杆菌与其他原 核细胞型微生物 微生物学教研室 1、检查牙垢中螺旋体（1份/人） 2、结核痰标本抗酸染色（1份/人） 3、真菌检查法（1份/人） 4、观察结核杆菌培养物（示教） 5、观察梅毒螺旋体形态（示教） 6、观察支原体集落（示教） 7、HIV（录象） 实验内容 教学目的 认识痰标本的抗酸染色方法及结核分枝杆菌的菌落特点 认识螺旋体及支原体形态学观察方法 认识真菌检查法 教学要求 掌握结核分枝杆菌的染色方法及结果判断 掌握真菌检查法 熟悉结核分枝杆菌的菌落特点与螺旋体及支原体形态学观察方法 结核痰标本抗酸染色 结核标本的检查有直接涂片，培养及动物接种等几种方法，直接涂片抗酸染色镜检找到抗酸杆菌，可作初步诊断。如标本量大，污染杂质多，含结核杆菌数较少时，直接涂片染色往往不易检出，因一般每毫升痰液含10万个结核杆菌以上才能检出，故如先浓缩集菌处理，再进行涂片检查，可以提高阳性率。在镜检发现抗酸性不强或菌型不典型时，应考虑非典型分枝杆菌，需作进一步分离培养鉴定。动物接种可供标本分离及测定结核杆菌的毒力。 结核痰标本抗酸染色 原理 抗酸性染色也是一种重要的鉴别染色。由于抗酸性细菌含有分枝菌酸。在完整的细胞壁中它能与石炭酸和复红所形成的复合物牢固地结合，并能抵抗酸性酒精的脱色，故被染成红色，而非抗酸性细菌因不含有分枝菌酸，故易脱色，并被复染剂染成兰色。 材料 标本：肺结核病人的痰 染液：石炭酸复红 碱性美兰 3％盐酸酒精 其他: 接种环、酒精灯、75 ％酒精 注意：厚涂片 结核病人痰标本涂片 重复三次! 箭头所示为抗酸菌 形态 染色