[医药卫生]第四章 主要组织相容性抗原.ppt

首先在白细胞上发现且含量最高，故又称人类白细胞抗原(human leukocyte antigen, HLA). 第一节 MHC 结构及其多基因特性 第二节 MHC的多态性 2. MHC是协同刺激分子 MHC-Ⅰ分子将内源性抗原递呈给CD8+T细胞,对CTL的识别起限制作用. MHC-Ⅱ类分子将外源性抗原递呈给CD4+T细胞,对Th的识别起限制作用. 3. MHC限制性: 免疫细胞相互作用时,只有当双方的MHC分子一致时,免疫应答才发生. 4. 对免疫应答强弱的影响.某个体的MHC分子与抗原配位的结合具有高度亲和力,则该个体对此抗原的免疫刺激呈高反应. 第六节 HLA检测技术 一、? 血清学分型技术 （一）?? HLA-Ⅰ类抗原的检测 HLA-A、B、C抗原型别鉴定均借助微量淋巴细胞毒试验或补体依赖的细胞毒试验（CDC）。 原理：取已知HLA抗血清加入待测外周血淋巴细胞，作用后加入兔补体。充分作用后加入染料（台盼蓝或伊红），在倒置显微镜下判断结果，着染的细胞为死亡细胞，表示待检淋巴细胞表面具有已知抗血清所针对的抗原。 也可用荧光染料（EB）代替伊红或台盼蓝，在荧光显微镜下观察。 （二）?? HLA-DR、DQ抗原检测 HLA-DR、DQ抗原分型方法同HLA-Ⅰ类抗原，但所用抗血清须经过血小板吸收以去除针对Ⅰ类抗原的抗体。 另外，待测细胞须是经纯化的B细胞。 二、? 细胞学分型技术 细胞学分型法是用混合淋巴细胞反应（mixed lymphocyte reaction, MLR）作为基本技术，通过测定受检淋巴细胞对标准分型细胞的增殖反应进行分型判定的方法。 纯合子分型细胞（homozygous typing cell, HTC）分型法（阴性分型法）：标准分型细胞为纯合子分型细胞，由于该种细胞一对同源染色体上的两个单元型完全相同，所以只表达一种HLA-Ⅱ类抗原。其与受检淋巴细胞混合进行MLC时，若受检淋巴细胞抗原与HTC相同，则不发生或仅出现轻微的增殖反应。通常可用来检测HLA-Dw特异性。 预致敏淋巴细胞分型法（primed lymphocyte typing, PLT） （阳性分型法） ：采用已知的致敏淋巴细胞作为应答细胞，当用灭活的受检者淋巴细胞作为刺激细胞时，若出现再次应答反应，则表明受检者细胞表面的HLA-Ⅱ类抗原型别与已知预致敏淋巴细胞的型别相同。此方法常用来测定HLA-DP特异性。 由于分型细胞来源困难以及操作手续繁琐，细胞学分型技术正逐渐被淘汰。 三、DNA分型技术 （一）RFLP与PCR-RFLP分型法 不同个体的HLA抗原DNA碱基序列的差异造限 制性内切酶识别位置及酶切位点数目的不同，从 而产生数量和长度不一的DNA酶切片段。用特异 性探针对整个基因组DNA酶切片段进行杂交，即 可分析限制性长度片段多态性（restriction fragment length polymorphism, RFLP），借 以确定HLA的型别。 若对DNA片段进行体外PCR扩增，再用限制性 内切酶进行酶切分析，则称为PCR-RFLP分型法。 （二）?? PCR-SSO分型法 用人工合成的HLA型别特异的寡核苷酸序列作为探针，与待测细胞经PCR扩增的HLA基因片段杂交，从而确定HLA型别。 PCR技术可将HLA复合体上指定基因片段特异性地扩增5~6个数量级；而专门设计的序列特异的寡核苷酸探针（sequence-specific oligonucleotide probe，SSOP ）又能探测出等位基因间1~2个核苷酸的差异，故PCR-SSO技术具有灵敏度高、特异性强、所需样本量少等优点。 （三）?? PCR与SSP分型法 目前常规的HLA-DNA分型技术，包括上述的PCR-RFLP、PCR-SSO等，最终均需用标记的特异性探针与扩增产物进行杂交，再分析结果。 PCR与SSP分型法乃设计出一整套等位基因组序列特异性引物（sequence specific primer, SSP），借助PCR技术获得HLA型别特异的扩增产物，可通过电泳法直接分析带型并决定HLA型别，从而大大简化了实验步骤。 （四） PCR-SSCP技术 即PCR与单链构象多态性（single strand conformation polymorphism,SSCP）分析相结合的方法。 原理：单链DNA可形成稳定的构象，在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中其迁移率不仅受链的大小，而且受链的核苷酸顺序的影响。由于使用相同引物扩增产物长度一致，因而单链DNA在电泳中的迁移格局反映了单链核苷酸组成的不同，可十分敏感地检测等位基因间DNA顺序的微小差别，目前此技术已应用于DP等位点的分型。  此外，目前已建立的