高效液相色谱仪演示文稿.ppt

第二部分高效液相色谱仪及简单操作维护;HPLC技术的发展过程;HPLC和经典液相色谱法的比较;高效液相色谱法的特点;;流动相和储液罐;（2）流动相----使用限制;（2）流动相----过滤;流动相 在线过滤：;流动相 抽真空过滤;流动相的要求：;流动相的要求： (2)互溶性;流动相的要求： (3)紫外吸收;;;;甲醇和水@210nm;流动相的要求：(4)pH的影响;高压输液泵和梯度洗脱装置;高压泵的分类;往复型泵 目前使用的是双柱塞往复式并联泵和双柱塞往复式串联泵 ;;双柱塞往复式串联泵示意图;输液系统的辅助设备 主要有管道过滤器、脉动阻尼器、由压力传感器组成的压力测量、显示装置，以及流动相流量的测量装置;梯度洗脱装置 梯度洗脱技术可以提高柱效、缩短分析时间，改善检测器的灵敏度，它类似于GC种使用的程序升温技术  影响梯度洗脱的主要因素有：溶剂的纯度、溶剂的互溶性、检测器的种类;四元低压梯度系统;;四元高压梯度系统; ;注意事项：1、 必须设定高、低压极限2、 缓冲溶液与有机溶剂转换时用去离子水清洗泵 3、缓冲盐溶液的浓度不能过高，pH范围1～13，Cl-的浓度小于0.1mol/L；; ? 经常使用，每周至少更换一～二次（95%的水） ? 很少使用则每次使用前必须更换;泵压力不正常的主要原因： 气泡，主动阀故障，出口阀故障，密封垫或柱塞杆磨损，渗漏或堵塞，比例阀故障，传感器故障，使用比例阀混合时盐浓度太高;进样装置 六通阀进样装置;六通阀进样装置 正面 ;六通阀进样装置 反面连接; 7725i型六通阀的特点 旋转操作时不中断流速 可部分充满（可变），也可全部充满(固定)loop 孔角度较宽，改善了操作的容易程度 进样从1mL到5ml 内部有进样信号线（7725i）;容易使用，可靠;;;一定不能使用尖针！它会严重刮坏转子垫圈; 进完样后及时冲洗进样器，特别是用盐或缓冲液作流动相（由于这些溶液会形成结晶从而磨损垫圈）;冲洗方法：A. 将进样器转至Inject和Load位置，利用液相泵输送高纯水冲洗 (这时是冲洗样品环及沟槽）.B.用阀清洗接头和注射器冲洗。;如何判断手动进样器的密封圈漏？;进样装置自动进样器;进样针穿过垫圈进入瓶中;注射器抽取所设定的样品体积;进样针收回;转入针端口使之并成为流路的一部分;色谱柱;色谱柱与仪器的联接; ;? 自制相应的转换接头 ? 使用“通用”型接头（锥箍及螺母） ;;色谱柱色谱性能的评价;测柱效-良好的色谱实验习惯;测柱效的方法;计算色谱柱的柱效 N;柱效低--柱外因素;色谱柱的正确使用及操作;正确使用色谱柱 样品方面;正确使用色谱柱 流动相方面;反相C18（硅胶基质）色谱柱的清洗;柱压高--柱外因素;色谱柱的存放; 检测器;紫外检测器;比耳定律;溶剂的影响;背景吸收的影响;影响紫外检测器灵敏度的因素; 定波长检测器 紫外检测器种类 可变波长检测器 二极管阵列检测器 ;紫外-可见光检测器光路示意图;可变波长紫外检测器; 光电二极管阵列检测器（DAD）;DAD检测器的主要特点 ;;例：山梨酸和苯甲酸部分 分离的色谱峰 a.山梨酸 b.苯甲酸 c.混合物;流通池示意图;;检测器的维护：? 保持清洁，每天用后与色谱柱一起清洗? 不定期用强溶剂反向冲洗检测器（流通池）? 使用脱过气的流动相，防止气泡滞留池内? 检测器灯有一定寿命 平衡和清洗色谱柱时不要开灯，检测中途不要随意开、关灯 ;基线噪音大可能由那些原因引起 泵压不稳：气泡，色谱柱污染，系统管路污染，流通池污染， 灯强度不足：光学系统老化或污染，参数设置不合理; 基线噪音 ;基线漂移;鬼 峰;峰 型;峰 型;峰 型;峰宽;柱外体积效应的影响;色谱工作站;液相色谱基本操作步骤;（4）系统平衡 第一步：先用甲醇或乙腈冲洗流路约20分钟，平衡活化色谱柱，并赶走管路中的杂质和水分。 第二步：平衡色谱柱 方法一：若流动相为有机相与水相的混合物，则第一步完成后，按照分析样品的需要调节有机相与水相的比例后冲洗流路约30分钟后，待基线走平后即可进样。 方法二：若流相相中含有缓冲盐溶液、有机/无机酸，则第一步完成后，先用95%的去离子水冲洗流路约20分钟后，再按照分析样品的需要调节流动相的比例，冲洗流路约30分钟，待基线走平后即可进样。 ;（5）色谱柱平衡后，打开检测器（开灯）基本 （6）测定样品 （7）清洗仪器 色谱柱及流路清洗： 清洗流路时，关闭检测器的氘灯。使用缓冲盐的“C”管路必须用去离子水冲洗