聚合酶链式反应PCR扩增和扩增产物克隆概述PCRPolymerase.PDFVIP

中国试剂网 3.12.5.3 聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆 概 述 PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增 DNA 或 RNA 的方法.它包括三个基本步骤: (1) 变性(Denature): 目的双链DNA 片段在 94 ℃下解链; (2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50 ℃左右)下与模 板上的目的序列通过氢键配对;(3) 延伸(Extension):在 Taq DNA 聚合酶合成 DNA 的最适温度下, 以目的 DNA 为模板进行合成. 由这三个基本步骤组成一轮循环,理 论上每一轮循环将使目的 DNA 扩增一倍（图 4 ）,这些经合成产生的 DNA 又可 作为下一轮循环的模板,所以经 25-35 轮循环就可使 DNA 扩增达 106 倍。 一、 PCR 反应中的主要成份 1. 引物：PCR 反应产物的特异性由一对上下游引物所决定。引物的好坏往 往是 PCR 成败的关键。引物设计和选择目的 DNA 序列