红外光谱-北京大学单分子与纳米生物学试验室.PDFVIP

生物物理技术作业 基础医学院生物物理系王琼玲 学号 红外光谱 红外光谱是一种很常用的研究大分子的方法，它主要研究样品分子对光 的吸收，得到的是有关样品分子振动能级的信息。 分子的振动包括整个分子的振动和分子局部的振动。红外光谱主要是分子 局部振动，即基团或化学键振动所产生的。吸收频率的高低与分子振动方式相关， 通常把键的振动分为两大类：伸缩振动和弯曲振动。分子的振动能量比转动能量 大，当发生振动能级跃迁时，不可避免地伴随有转动能级的跃迁，所以无法测量 纯粹的振动光谱，而只能得到分子的振动-转动光谱，这种光谱称为红外吸收光 谱。 红外吸收光谱是一种分子吸收光谱。当样品受到频率连续变化的红外光照射 时，分子吸收了某些频率的辐射，并由其振动或转动运动引起偶极矩的净变化， 产生分子振动和转动能级从基态到激发态的跃迁,使相应于这些吸收区域的透射 光强度减弱。记录红外光的百分透射比与波数或波长关系曲线，就得到红外光谱。 红外光谱仪的分类： 目前主要有两类红外光谱仪：色散型红外光谱仪和 Fourier （傅立叶）变换 红外光谱仪。目前几乎所有的红外光谱仪都是傅立叶变换型的。 色散型红外光谱仪 色散型红外光谱仪的组成部件与紫外-可见分光光度计相似，但对没一个 部件的结构、所用的材料及性能与 紫外- -可见分光光度计不同。它们的排列顺 序也略有不同，红外光谱仪的样品是放在光源和单色器之间；而紫外- -可见分 光光度计是放在单色器之后。 Fou rier 变换红外光谱仪（FTIR） Fourier 变换 红外光谱仪 没有色散元件，主要由光源 （硅碳棒、 高压汞灯）、Michelson 干涉仪、检测器、计算机和记录仪组成。核心部分为 Michelson 干涉仪，它将光源来的信号以干涉图的形式送往计算机进行 Fourier 变换的数学处理，最后将干涉图还原成光谱图。它与色散型红外光度计的主要区 别在于干涉仪和电子计算机两部分。 Fourier 变换 红外光谱仪工作原理； 仪器中的 Michelson 干涉仪的作用是将光源发出的光分成两光束后， 再以不同的光程差重新组合，发生干涉现象。当两束光的光程差为 λ/2 的偶数倍 时，则落在检测器上的相干光相互叠加，产生明线，其相干光强度有极大值；相 生物物理技术作业 基础医学院生物物理系王琼玲 学号 反，当两束光的光程差为 λ/2 的奇数倍时，则落在检测器上的相干光相互抵消， 产生暗线，相干光强度有极小值。由于多色光的干涉图等于所有各单色光干涉图 的加合，故得到的是具有中心极大，并向两边迅速衰减的对称干涉图。 干涉图包含光源的全部频率和与该频率相对应的强度信息，所以如有 一个有红外吸收的样品放在干涉仪的光路中，由于样品能吸收特征波数的能量， 结果所得到的干涉图强度曲线就会相应地产生一些变化。包括每个频率强度信息 的干涉图，可借数学上的Fourier 变换 技术对每个频率的光强进行计算，从而 得到吸收强度或透过率和波数变化的普通光谱图。 Fourier 变换红外光谱仪的特点： （1）扫描速度极快，其在整扫描时间内同时测定所有频率的信息，一般只要 1s 左右即可。因此，它可用于测定不稳定物质的红外光谱。（2）具有很高的分辨 率，可达 0.1~0.005 cm-1 （3）灵敏度高 （4） 因 Fourier 变换 红外光谱仪 不 用狭缝和单色器，反射镜面又大，故能量损失小，到达检测器的能量大，可检测 10-8g 数量级的样品。 除此之外，还有光谱范围宽（1000~10 cm-1 ）；测量精度高，重复性可达 0.1%；杂散光干扰小；样品不受因红外聚焦而产生的热效应的影响；特别适合于 与气相色谱联机或研究化学反应机理等。 红外光区的划分 红外光谱波长范围约为 0.78 ~ 103µm，根据仪器技术和应用不同，习惯上又将 红外光区分为三个区：近红外光区 （0.78 ~ 2.5µm ），中红外光区（2.5 ~ 25µm ）， 远红外光区（25 ~ 103µm ）。 近红外光区（0.78 ~ 2.5µm ） 近红外光区的吸收带主要是由低能电子跃迁、含氢原子团 （如 O—H、 N—H、C—H）伸缩振动的倍频吸收等