[生物学]5 动物细胞制药.ppt

应用 1、生产有价值的蛋白质制品，（如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体、动物激素） 2、检测有毒物质 3、用于某些器官移植 高等哺乳动物受体细胞的条件 细胞系特征 丧失细胞接触抑制性和锚地依赖性特征， 遗传稳定性 外源基因多次传代后不至于丢失，易于长期保存 合适的标记 便于转化株的筛选和维持 生长快且齐 分裂周期短，生长均一，便于控制 便于大规模培养 大多数正常的高等哺乳动物细胞并不能同时具备上述条件，癌细胞能满足上述前四项要求，但在安全性能上有欠缺。 安全性能好 不合成分泌致病物质，不致癌 高等哺乳动物受体细胞的遗传标记 营养缺陷型的哺乳动物受体细胞 5-磷酸核糖-1-焦磷酸（PRPP） 次黄嘌呤核苷一磷酸（HMP） 次黄嘌呤核苷（HR） GMP AMP 尿嘧啶核苷一磷酸（UMP） 胸腺嘧啶核苷一磷酸（TMP） 胸腺嘧啶核苷（TR） 嘌呤核苷酸生物合成途径 嘧啶核苷酸生物合成途径 次黄嘌呤磷酸 核糖转移酶 （HPRT） （TK） 胸腺嘧啶 核苷激酶 氨基喋呤（AP） 氨基喋呤（AP） 从头合成途径 补救合成途径 重新合成途径 补救途径 高等哺乳动物受体细胞的遗传标记 营养缺陷型的哺乳动物受体细胞 含有胸腺嘧啶核苷激酶（TK）编码基因缺陷的受体细胞（tk -）不能在含有次黄嘌呤核苷、氨基喋呤、胸腺嘧啶核苷的培养基上（HAT培养基）生长，载体上的标记基因tk能与之遗传互补。 含有次黄嘌呤磷酸核糖转移酶（HPRT）编码基因缺陷的受体细胞（hprt -）不能在含有次黄嘌呤核苷、氨基喋呤、胸腺嘧啶核苷的培养基上（HAT培养基）生长，载体上的标记基因hprt与之遗传互补。 常用的高等哺乳动物受体细胞 迄今为止，用于医疗用品（药物、抗体、诊断试剂）大规模生产的高等哺乳动物受体细胞主要还是中国仓鼠卵巢细胞（CHO/dhFr- ），其优势有如下几个方面： 遗传背景清楚，生理代谢稳定 与人的亲缘关系接近，外源蛋白修饰准确 基因转移和载体表达系统完善 耐受剪切力，便于大规模培养 被美国FDA确认为安全的基因工程受体细胞 （4）维生素 维生素是维持细胞正常生理状态的一种重要生物活性化合物，在细胞中多形成酶的辅基或辅酶，对细胞的代谢过程有重要影响。 （5）无机离子 无机离子分为两组，一种是含量较高的，包括维持膜电势的（Na+，K+），维持渗透压平衡（Na+，Cl－），作为酶的辅因子（Mg2+），促进细胞贴附（Mg2+Ca2+），起缓冲作用（HPO42-，HCO3-）；另一种势微量元素，如铁、锰、锌、钼、硒、钒、铜。 （6）脂类和磷脂前体 在使用血清的细胞培养中，脂类来自血清，在无血清培养中，有些细胞需要添加脂类，如胆固醇、脂肪酸、磷脂。特别是缺陷型细胞，对某种脂类有很高的依赖性。 非营养性物质 （1）抗生素 细胞培养中，特别是原代细胞培养中，常使用抗生素抑制微生物的污染。 （2）pH缓冲剂 最常用的缓冲剂是碳酸氢钠，常用浓度26mmol/L，接近血中浓度，必须与5％～10％CO2平衡，否则培养基迅速变碱。HEPES是缓冲能力很强的化合物，但由于它相当昂贵，细胞大规模培养中很少使用。 （3）酚红 酚红普遍作为培养基的pH指示剂 （4）保护剂 细胞保护剂指保护细胞免受由渗透压变化、剪切、毒性金属和氧化剂所引起的损伤的物质。在生物反应器中培养的细胞会受到机械搅拌和气泡运动所产生的剪切损伤，某些大分子化合物，如甲基纤维素、葡聚糖、PEG、聚乙烯吡咯烷酮、Pluronic F68、血清白蛋白，能够减轻这种损伤。 （5）还原剂 某些还原剂在细胞培养中有特殊作用。β－巯基乙醇在杂交瘤细胞培养中能刺激抗体分泌，并促进半胱氨酸利用。 （6）血清 常用的血清是小牛血清、胎牛血清、马血清和人血清。最常用的是小牛血清。 血清是极其复杂的混合物，含有食物物质、代谢物、激素、血浆蛋白、破碎细胞释放物质、采血中引入的污染物。由于历史原因，商业培养基大都是按添加血清来设计的，使用血清技术也很成熟，尽管使用血清有许多缺点，仍将其作为细胞培养最重要的添加剂普遍采用。 培养物的污染及防止 1、污染途径 （1） 空气：空气流动性大，如果培养操作场地于外界隔离不严格或消毒不充分，外界不洁空气很容易进入造成污染。因此，培养设施不能设在通风场所。无菌操作应在净化台内进行，工作时要带口罩 2、 器材：各种培养器皿3、 操作：实验操作无菌观念不强，技术不熟练，使用污染的器皿或封瓶不严等，都可以造成污染。4、 血清：有些血清