[生物学]南昌大学遗传学课件 第1讲 DNA的复制机理与PCR技术1.pptVIP

DNA的复制机理 南昌大学生科院 彭晓珏 关键问题 什么实验证据表明DNA复制是通过两条母 链分离，再以每条链为模板合成新的互补链 的？ 复制DNA的酶通过什么机制催化DNA链的合成？ DNA复制需要什么酶和蛋白，它们的功能是什么？ DNA半保留复制的生物学意义？ 本节主要内容 DNA复制的半保留性 DNA复制的原点、方向和方式 DNA的复制过程 利用蔗糖密度梯度离心分离植物叶片中的线粒体 1.2 DNA半保留复制的证据 课后思考题 半保留的复制机制具有什么生物学意义？ 生物信息学分析 利用复制起始结构的特点，开发生物信息学分析软件，寻找和分析DNA序列 中的复制起始位点，并设计相关实验验证. 线粒体导肽的验证 2.3 复制的方式 滚环复制模型 D环复制模型 θ环复制模型 泡状或Y形结构 2.3.1 滚环复制模型（1968，Gilbert) 哪些 DNA进行滚环复制？ 2.3.2 D环复制模型 线粒体，叶绿体DNA 2.3.3 θ环复制模型 3.DNA的复制 DNA复制的起始 DNA复制的延伸 DNA复制的终止 3. DNA的复制 3.1 DNA复制的起始 3.DNA的复制 DNA复制的起始 DNA复制的延伸 DNA复制的终止 3. DNA的复制 3.2 DNA复制的延伸 3.2.2 DNA复制过程中协调 DNA聚合酶III全酶的循环，β夹钳控制了核心酶与DNA结合的协调 3.DNA的复制 DNA复制的起始 DNA复制的延伸 DNA复制的终止 3.4 线状 DNA的末端复制机制 环化：病毒，质粒 共价连接形成多聚体 (线状DNA分子） 发卡引导（草履虫） 末端蛋白引导（脊髓灰质病毒） 端粒酶机制 * * * * * * * * * * * * 目前，在大肠杆菌中已经发现了五种DNA聚合酶。其中聚合酶Ⅳ和聚合酶Ⅴ主要是在DNA损伤的SOS修复中具有功能；聚合酶Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ三种酶在DNA复制过程中均具有不同的作用，只有聚合酶Ⅲ才是真正的DNA复制酶，聚合酶Ⅰ是DNA复制过程中产生的错配碱基的主要修复酶，聚合酶Ⅱ也同样涉及到错配碱基的修复功能,这个表中列出了大肠杆菌中已经确认了的三种聚合酶的部分重要特性。 从中我们发现，DNA聚合酶Ⅱ最小，分子量仅为90千道尔顿；聚合酶Ⅰ居中，分子量为109千道尔顿；聚合酶Ⅲ分子量最大，为900千道尔顿。并且，聚合酶Ⅰ和Ⅱ均为单链分子，而聚合酶Ⅲ则是由10种共22个亚基所组成。 三种酶均具有5′到3′的聚合酶活性以及3′到5′的外切核酸酶活性；但是只有聚合酶Ⅰ具有5′到3′的外切核酸酶活性。 * * * * * * * * * 说到DNA,首先不能不提及两位伟大的科学家，Watson和Crick, 他们提出了DNA双螺旋结构的模型，并把这一结果发表在1953年4月的Nature杂志上。 这一模型的提出在生命科学的发展史上具有化时代的意义，就遗传学上来说，遗传学也开始从分子生物学的水平上来研究和探讨遗传学的现象。 * 了解完DNA的复制的起点，方向后，我们来看一下各种类型的DNA的复制的方式，目前研究比较透彻的DNA的复制的方式主要有以下四种模型，即DNA滚环复制模型，D 环复制模型，θ环复制模型和泡状或Y形结构。接下来让我们逐个了解各种复制模型的模式图以及是哪些类型的 DNA分别采用这些方式进行复制。 第一种—滚环复制模型，真核rDNA, 大肠杆菌F因子DNA的转移，A噬菌体裂解途径的复制，φX174, M13. G4等 单链环DNA 噬菌体第二阶段复制都是进行 滚环复制的. 那么滚环复制是怎样进行的了，让我们来看一下模式图，双链环状DNA中有一条链断裂，另一条链未断裂。以未断裂的DNA链为模板，在断裂的一条链的3′端不断地加上核苷酸，由于3′链的不断延长，而5′端的链则不断。 了解完DNA复制过程中的各种酶和所需的因子，接下来让我们学习一下DNA的复制的具体的过程， DNA的复制过程主要包括DNA复制的起始，复制的延伸，和复制的终止。 * 一，增加DNA的合成速度，主要是通过提高DNA聚合酶的移动速度； 二，防止先导链上的核心酶滑落。 聚合酶的核心酶和 β夹钳在冈崎片段合成完成之后解离， 并在下一个起点重新结合 Origin of replication: 复制原点 Single-strand binding protein:单链