[生物学]蛋白相互作用酵母双杂交.pptVIP

蛋白相互作用与酵母双杂交 Protein-protein Interaction Yeast Two-hybrid 黄宝玉 2012.8.17 Slide 1 报告内容： 蛋白相互作用与研究方法 酵母双杂交原理和方法 酵母双杂交的发展 已有实验的进展 存在问题与下一步计划 Slide 2 Protein-protein Interaction 蛋白质之间相互作用以及通过相互作用而形成的蛋白复合物是细胞各种基本功能的主要完成者。 几乎所有的重要生命活动，包括DNA的复制与转录、蛋白质的合成与分泌、信号转导和代谢等等，都离不开蛋白质之间的相互作用。 Slide 3 蛋白质相互作用研究技术 Genetic Yeast Two-hybrid Phage Display Mutational analysis Biochemical Immunoprecipitation (IP) Co-Immunoprecipitation (Co-IP) Pull-Down Assays Far Western Chemical Crosslinking Label-transfer FeBABE mapping Fluorescent Immunofluorescence co-localization FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer) Slide 4 Slide 5 噬菌体展示技术的原理 融合蛋白 PIII 基因型 表达型 噬菌体展示技术是将外源蛋白或多肽的 DNA 序列插入到噬菌体衣壳蛋白结构基因的适当位置，使外源基因随衣壳蛋白的表达而表达，同时，外源蛋白随噬菌体的重新组装而展示到噬菌体表面。通过体外亲和（绑定）靶分子筛选到的噬菌体克隆经过下一轮扩增而富集。 Slide 6 biotin antigen Solution phase selection with biotinylated antigen Slide 7 Bind to Streptavidin coated microtitre wells Slide 8 Wash to remove unbound phage particles. Slide 9 Elute bound phage Slide 10 Amplify eluted phage Repeat selection Analyze a) ELISA b) Specificity c) Sequencing d) Affinity e) Activity E.coli 感染 和扩增 Slide 11 Slide 12 Slide 13 RIGI Experimental Control (GST-Fusion) (GST) GST GST MAVS GST GST沉降示意图 GST-pull down原理 RIGI RIGI Slide 14 Cross-linking Slide 15 报告内容： 蛋白相互作用与研究方法 酵母双杂交原理和方法 酵母双杂交的发展 已有实验的进展 存在问题与下一步计划 Slide 16 酵母双杂交系统的功能 Slide 17 酵母双杂交原理图 酵母双杂交的简单介绍 Slide 18 酵母双杂交系统的原理 Slide 19 (FieldsSong,1989) 酵母双杂交系统:三个启动子，四个报告基因 Slide 20 三个启动子，四个报告基因 HIS3. When bait and prey proteins interact, Gal4-responsive His3 expression permits the cell to biosynthesize histidine and grow on –His minimal medium. ADE2.When two proteins interact, Ade2 expression is activated, allowing these cells to grow on –Ade minimal medium. AUR1-C. A dominant mutant version of the AUR1 gene that encodes the enzyme inositol phosphoryl ceramide synthase.its expression confers strong resistance (AbAr) to the otherwise highly toxic drug Aureobasidin A. M