4-核酸的结构、功能与性质.pptVIP

核酸的结构、性质与功能 核酸的研究历史： ? 1868年，瑞士外科医生Fridrich Miescher从脓细胞核中分离到核酸样物质。 ?核酸分为DNA和RNA。DNA存在于细胞核和线粒体内，RNA存在于细胞质和细胞核内。 1944年，Oswald Avery通过肺炎双球菌转化实验证实了DNA是遗传的物质基础。 1953年　Watson和Crick 53－72年： 核酸的一级结构 戊糖 碱 基 互变异构效应?导致基因自发突变 由于DNA分子中的A、T、G、C四种碱基的第六位碳原子上的酮基(T、G)和氨基(A、C)，T、G不是酮式就是烯醇式，C、A不是氨基式就是亚氨基式。T和G会以酮式和烯醇式两种互变异构的形式出现，而A和C则以氨基式或亚氨基式两种状态出现。由于化学结构的平衡一般趋向于酮式和亚氨基式，因此，在DNA双链结构中一般总是以AT与GC碱基配对的形式出现。可是在偶然情况下，T也会以烯醇式形式出现，恰好DNA的合成到达这位置的一瞬间，通过DNA多聚酶的作用，在它相对应的位置上出现配对碱基G，而不出现常规的A。当DNA再次复制时，通过G和C配对，就使原来的AT转变为GC。同样如果C以亚氨基形式出现，在DNA复制的合成到达这位置的一瞬间，DNA对应链上将是A，而不是G。 mutation ?在DNA和RNA中都有A、 G 、 C，T只出现在DNA分子中，U则只出现于RNA分子中。 核苷酸=核苷+磷酸 一般将细胞内染色体包含DNA的总体称为基因组。同一物种的基因组DNA含量总是恒定的，不同物种间基因组大小和复杂程度差异极大。真核生物具有复杂的染色体结构，其基因组DNA上存在着单一序列和大量重复序列，大多数真核基因都是不连续的，在成熟RNA中出现的部分称为外显子，在DNA拼接过程中被删除的部分称为内含子。原核生物基因组上功能相关的基因常常串连在一起并转录在同一mRNA分子中，形成多顺反子结构。某些病毒中会出现基因重叠。 DNA序列的测定-双脱氧链终止法 原理是采用核苷酸链终止剂—2、3双脱氧核苷酸终止DNA的延长。由于它缺少形成3-5磷酸二脂键所需要的3-OH，一旦参入到DNA链中，此DNA链就不能进一步延长。根据碱基配对原则，每当DNA聚合酶需要dNMP参入到正常延长的DNA链中时，就有两种可能性，一是参入ddNTP,结果导致脱氧核苷酸链延长的终止；二是参入dNTP,使DNA链仍可继续延长，直至参入下一个ddNTP。根据这一方法，就可得到一组以ddNTP结尾的长短不一的DNA片段。 ? ? ? ? ? ? ? ?  方法是分成四组分别为ddAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP反应后，聚丙烯酰胺凝胶电泳按泳带可读出DNA序列。 DNA序列测定全自动 DNA全自动测序 利用4种不同的荧光分子分别标记4种ddNTP。4个反应分开进行，产物合并在一个泳道中电泳分离，根据每条区带的荧光颜色不同加以识别读序，这样不但可提高每次分析样品的数量，又克服了泳道间差异造成的读序误差。与传统的手工测序比较：①安全，无污染；用荧光素代替同位素，避免了放射性同位素的污染和对人体的危害；②模板用量大大减小，单链DNA模板用量为0.4μg，双链DNA质粒模板用量为0.8μg，PCR产物用量为5ng～20ng；③测序长度大大提高，一般可达550bp～800bp。 核酸的二级结构 DNA的双螺旋结构 DNA三股螺旋（H-DNA,ts-DNA） 多聚嘧啶和多聚嘌呤组成的DNA螺旋区段，其序列中有较长的镜像重复时，形成局部三股配对，并互相盘绕的三股螺旋，其中两股的碱基按Watson-Crick方式配对，第三股多聚嘧啶（镜像重复）通过TAT和CGC+配对，而处于双螺旋的大沟中。 DNA三股螺旋 DNA半保留复制的证明 Meselson与stahl(1958)用15N重同位素及密度梯度超速离心证明DNA复制是一种半保留复制。 E.coli.的一个温度敏感株，在42℃时，能使DNA在完成复制后，不再开始新的复制过程，而在25℃时复制功又能能恢复。 PCR PCR的理论基础是DNA的半保留复制 DNA的基本功能:　是生物遗传信息复制的模板和基因转录的模板，它是遗传的物质基础。 DNA的三级结构 三 DNA的三级结构 双螺旋进一步扭曲形成的超螺旋。是一种比双螺旋更高层次的空间构象。包括：线状DNA形成的纽结、超螺旋和多重螺旋、环状DNA形成的结、超螺旋和连环等 DNA的超螺旋 ?原核生物：大部分原核生物的DNA是共价封闭的环状双螺旋，这种双螺旋还可以再次螺旋化形成超螺旋。 ?真核生物：DNA和蛋白质组装成染色体，染色体的基本单位是核小体。 ?核小体由DNA和组蛋白构成。组蛋白有H1，H2A，H2B，H3和