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分光光度计 第一节 概述 第二节 基本原理 一、光的基本特性 二、吸收光谱曲线 三、光吸收定律 第三节 紫外-可见分光光度计 一．紫外-可见分光光度计基本组成部件 二、紫外-可见分光光度计的类别 第四节 紫外可见分光光度法条件选择 一、显色条件的选择 二、测量条件的选择 第五节 定量方法 第六节 使用和维护 分光光度法： 根据物质对不同波长的单色光的吸收程度不同而对物质进行定性和定量分析的方法。  第一节 概述 分光光度法的特点： （1）灵敏度高。 一般可测定浓度下限为10-5～10-6mol·L-1(达μg量级)的物质。 （2）准确度高。相对误差一般为2%~5%。 （3）设备和操作简单，价格低廉，分析速度快。 （4）应用广泛。 一、光的基本特性 光是一种电磁波，具有波动性和粒子性。 光子的能量--爱因斯坦质能方程式 式中，E 为能量（1ev=1.602*10-19J）； h为普朗克常数(6.626×10-34J.s)；ν为频率；c为光速(299792458m/s)；λ为波长。 第二节 基本原理 波长：用λ表示。 λ可用相邻两个波峰或波谷之间的距离来表达。单位常用nm、cm。 注：1m=102cm=103mm=106μm=109 nm 摘自GB/T14666-1993 可见光： 波长范围为380～780nm 紫外光：10～380nm 分10～200nm远紫外也叫真空紫外 200~380nm近紫外 单色光： 是指具有同一种波长的光。 复合光： 是指含有多种波长的光。 二、 吸收光谱曲线 1、透射比：用符号τ表示 当一束平行的单色光垂直照射到含有吸光物质的均匀透明溶液时，透射光通量和入射光通量之比。 φtr：透射光通量；φ0：入射光通量 τ 可以用小数表示，也可用百分数表示。 τ的范围：[0,1] τ的单位：无 τ 越大，溶液对光的吸收越小。 2、吸光度： 透射比倒数的对数。用A表示： A = lg(1/τ)= -lgτ A的范围：[0,+∞） A的单位：无 A 越大，溶液对光的吸收越大。 τ = 10- A 3、吸收光谱曲线 简称：吸收曲线、吸收光谱 每一种物质对不同波长光的吸收程度是不同的 。如果我们让各种不同波长的光分别通过被测物质，分别测定物质对不同波长光的吸收程度。以波长为横坐标，吸收程度为纵坐标作图所得曲线。 最大吸收波长max 吸收曲线表明了某种物质对不同波长光的吸收能力分布。 它的最高点所对应的波长叫最大吸收波长，用λmax表示。 三、光吸收定律 1、光吸收定律 又叫朗伯—比耳定律。 通式是：A = kbc 光吸收定律表明： 当一束平行单色光垂直入射通过均匀、透明的吸光物质的稀溶液时，溶液对光的吸收程度与溶液的浓度及液层厚度的乘积成正比。 它是紫外-可见分光光度法进行定量分析的理论基础——定量依据。 k叫“吸光系数” 它表示待测物质在单位浓度、单位厚度时的特征吸光度。 k与物质的性质、入射光的波长和溶液的温度等因素有关。 2、光吸收定律的适用范围 (1)只适用于单色性。 (2)只适用于稀溶液。 一般要求浓度小于0.01 mol·L-1以下。 (3) 适用于紫外光、可见光、红外光。 第三节 紫外-可见分光光度计 一．紫外-可见分光光度计基本组成部件 基本组成部件分五个部件： （一）光源： 用于提供足够强度和稳定的连续光谱。 常用的光源分为： 可见光源（热辐射光源） 和紫外光源（气体放电光源）两类。 热辐射光源用于可见光区，如钨丝灯和卤钨灯； 钨灯和碘钨灯可使用的范围在340 ～ 2500nm。 气体放电光源用于紫外光区，如氢灯和氘灯。 氢灯和氘灯。它们可在160 ～ 375 nm范围内产生连续光源。 另外，光源的供电一般都要用稳压电源，即加有一个稳压器。 （二）分光系统： 分光系统也叫单色器。 单色器是能从光源辐射的复合光中分出单色光的光学装置。 单色器的核心部分是色散元件，起分光的作用。 色散元件主要是棱镜和光栅。 棱镜有玻璃和石英两种材料。 玻璃棱镜只能用于可见光域内。 石英棱镜可用于紫外、可见和近红外三 个光域。 光栅可用于紫外、可见及红外光域 （三）吸收池（比色皿） 用于盛放试液的器皿就是吸收池（也叫比色皿、样品池）。 有玻璃和石英两种。 玻璃吸收池只能用于可见光域内。 石英吸收池可用于紫外、可见和近红外三 个光域。 常用的吸收池规格有：0.5cm、1.0cm、2.0cm、3.0cm、5.0cm等 吸收池使用方法 拿：只能捏两侧的毛玻璃面，不可接触光学面； 洗：依次用自来水、溶剂、待装液各润洗3次； 装：吸收池高度的2/3～3/4； 擦：先用滤纸吸干外壁，然后用擦镜纸或丝绸擦干； 查：内部溶液无气泡，光学面外壁无垃圾； 放：