[高二理化生]基因工程2.pptVIP

2、目的基因的获得方法： ①从基因文库获取目的基因 ②利用PCR技术扩增目的基因 ③直接人工合成 基因组文库和部分基因文库 ②利用PCR技术扩增目的基因 ②利用PCR技术扩增目的基因 原理： 过程： 条件： ③通过DNA合成仪直接人工合成 条件： 基因比较小且已知其序列 将目的基因导入植物细胞 将目的基因导入动物细胞 显微注射法 将目的基因导入微生物细胞 Ca2+处理法 检测是否插入了目的基因 原理： 过程： 检测是否转录出了mRNA 原理： 检测是否翻译成蛋白质 原理： 个体生物学水平的鉴定 （做抗虫或抗病的接种实验） 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法、Ca2+处理法 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 鉴定：抗虫或抗病的接种实验 3.人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体进一步加工合成，通过转基因技术，可以使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是（ 　） A.大肠杆菌　 B.酵母菌 C.噬菌体　 D.质粒DNA * 1.2基因工程的基本操作程序 四个步骤 1）目的基因的获取 2）基因表达载体 的构建 3）将目的基因导 入受体细胞 4）目的基因的检 测和鉴定 一、目的基因的获取 1、目的基因的概念： 目的基因是人们所需要转移或改造的基因,主要是指编码蛋白质的基因。 如与生物抗逆性相关的基因（苏云金芽孢杆菌的抗虫基因）、与优良品种相关的基因（种子贮藏蛋白的基因）、与生物药物和保健品相关的基因（干扰素基因）、与毒物降解相关的基因、与工业所需用酶相关的基因等。 可以从自然界中已有的物种中分离出来，也可以用人工方法合成。 ①从基因文库中获取目的基因： 基因文库: 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库。 基因组文库: 基因文库中包含了一种生物所有的基因,这种基因文库叫做基因组文库。 部分基因文库: 基因文库中包含了一种生物的一部分基因,这种基因文库叫做部分基因文库（如cDNA文库）。 基因组文库 部分基因文库 讨论：如何从基因文库中得到所需要的基因？ 依据：目的基因的有关信息。 如：根据基因的核苷酸序列 基因的功能 基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因翻译产物蛋白质等特性。 寻根问底—— （1）为什么要构建基因文库？直接从含有目的基因的生物体内提取不行吗？ 构建基因文库是获取目的基因的方法之一，并不是惟一的方式。如果所需要的目的基因的序列完全不知，或只知道目的基因序列的一段，或想从一种生物体内获得许多基因，或者想知道这种生物与另一种生物之间有多少基因不同，或者想知道一种生物在个体发育的不同阶段表达的基因有什么不同，或者想得到一种生物的全基因组序列，往往就需要构建基因文库。 如果所需要的目的基因序列已知，就可以通过PCR方式从含有该基因的生物的DNA中，直接获得，也可以通过反转录，用PCR方式从mRNA中获得，不一定要构建基因文库。 前提: 要有一段已知目的基因的脱氧核苷酸序列，以便合成引物。 DNA双链复制 受热解旋（90℃ －95℃）→引物与单链互补结合（55℃ －60℃） →DNA聚合酶作用下延伸（70℃ －75℃） DNA模板、引物、DNA聚合酶、四种脱氧核苷酸 能 根据蛋白质的氨基酸顺序推算出信使RNA核苷酸顺序，然后按照碱基互补配对原则，推算出基因DNA的脱氧核苷酸顺序。用游离脱氧核苷酸直接合成相应的基因。 讨论与思考：知道蛋白质的氨基酸序列，能否用人工合成目的基因？怎样做？ DNA合成仪 二、基因表达载体的构建——核心 1、过程： 1）用一定的限制酶切割质粒，使其出现一个切口，露出黏性末端。 2）用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端。 3）将切下的目的基因片段插入质粒的切口处，再加入适量DNA连接酶，形成了一个重组DNA分子（重组质粒） 思考：作为基因表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？ 不可以。因为目的基因在表达载体中得到表达并发挥作用，还需要有其他控制元件，如启动子、终止子；目的基因是否导入受体生物中需要有筛选标记，如标记基因。 3、目的： ①使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以复制遗传给下一代 ②使目的基因