微生物浊度法测红霉素的研究.pdfVIP

《同硝工业》·2009年霜30奠囊3期 微 生 物 浊 度 法 测 红 霉 素 韵-硪 究 陈智慧 摘 要 以培养基Ⅲ号为试验用培养基，金黄色葡萄球菌为试验菌，将红霉素稀释成不同的浓度， 寻找其呈直线相关的线性范围。建立浊度法测定红霉素效价含量的方法，并将浊度法测定的结果与管 碟法测定结果相比较 ，无显著差异。浊度法具有简便、精确、快速的特点，可用于红霉素的含量测定。 关键词 浊度法；红霉素；管碟法；培养基 中图分类号 R927．2 浊度法测定抗生素效价是利用抗生素在液体培 2．2 pH值 7．8磷酸盐缓冲液的制备 养基中对试验菌生长的抑制作用．通过测定培养后细 取磷酸氢二钾 (K：HPO4·3H20)5．59g与磷酸二氢 菌浊度值的大小，比较标准品与供试品对试验菌生长 钾 (KH2PO)0．41 加水定容至 1000ml，分装，灭菌。 抑制的程度，以测定供试品效价的一种方法。在 国际 2_3 标准溶液的配制 上，抗生素效价测定 以管碟法和 比浊法并行 浊度法具 精密称取适量红霉素标准品，按红霉素每 10mg 有耗时短 、灵敏度高 、操作简单 、人为影响因素少 、测 加乙醇4ml使之溶解 ，溶解后加灭菌水定容至50ml 定结果准确度与精密度高的优点，但浊度法对试验仪 容量瓶中，其浓度为 1000U／ml，备用。 器精密度要求较高，进 口仪器价格 昂贵。而国内对浊 2．4 含试验菌液体培养基的制备 度法试验用仪器研究开发较晚。因此，浊度法在 国内 接种试验菌的量．需作预测试验 。取制备好的菌 抗生素效价测定方面 尚未得到广泛应用。2005年版 悬液 0．25ml加入到400ml抗生素检定培养基 Ⅲ号 《中国兽药典》开始收载 比浊法，但未收载具体品种 。 中，混匀。使高 、低剂量管经培养后(35～37℃，一般 3～ 为了尽快实现浊度法在抗生素效价测定方面的应用． 4h1，测定的吸光值在0．3～0．7，且剂距相邻剂量间的 笔者对红霉素效价测定的浊度法进行了初步研究。 吸光度差值不小于 0．1t1。 1 试验材料与仪器 3 试验结果与分析 1．1 试验材料 3．1 线性及其范围试验 金黄色葡萄球菌[CMCC(B)260031、红霉素标准品 取配好的红霉素标准溶液(1000U／m1)，用 pH值 (批号 KH10596，效价 897U／mg)，均购 自中国兽医药 7．8的磷酸盐缓冲液稀释成最终浓度分别为 0．2、0．27、 品监察所 ：培养基Ⅲ(批号 自北京奥博星 0．36、0．49、0．66、0．89U／ml的溶液。取上述浓度溶液 生物技术有限公司)。 1．0ml加入到比色管 中，每个浓度做 5管 ，用 自定义 1．2 仪器 来处理13]。待抗生素溶液加好后，每管加入 9．0ml含试 WBS一100微生物浊度法测定仪 、ZY一3001V多功 验菌的培养基。同时取 pH值 7．8的磷酸盐缓冲液 能微生物 自动测量分析仪 ，均为北京先驱威锋技术开 1．0ml，加入 9．0ml含试验菌的培养基作为阳性对照。 发公司产品；万分之一或十万分之一 电子天平 ；高压 溶液和培养基加好后．盖上塞子，放入预热至 37℃的 灭菌锅；恒温干燥箱；容量瓶 ；移液管 ；刻度吸管。 WBS一100微生物浊度仪中设定程序。每 10min振摇一 2 试验方法 次，每次振摇 20s，培养 45min后，开始监测，每 10min 2．1 菌悬液的制备 测量一次吸光度 。其结果见表 1。 取金黄色葡萄球菌 [CMCC(B)260031的营养琼脂 斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上 ，在 35～