第4章 灭菌技术-1.pptVIP

第四章 灭菌技术 第一节 培养基灭菌 第二节 空气过滤除菌 何谓灭菌（sterilization）？ 灭菌是指用化学的或物理的方法杀灭或去除物料及设备中所有生命物质的技术或工艺过程。 Autoclave？ 与消毒（disinfection）的区别 消除毒害，这里的“毒害”就是指传染源或致病菌的意思，英文中的“dis-infection”也是“消除传染”的意思。 消毒是一种采用较温和的理化因素，仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的病原菌，而对被消毒的物体基本无害的措施。一般只能杀死营养细胞而不能杀死细菌芽孢 。 一、常用的灭菌方法 (一)化学物质灭菌 1.原理：与微生物细胞中的某种成分产生化学反应，如使蛋白质变性、酶类失活、破坏细胞膜通透性而杀灭微生物 2.常用化学消毒剂 甲醛（福尔马林），主要是气体杀菌，常用于染菌罐的处理和发酵厂房内部环境的定期消毒灭菌，10mL / M3。 乙醇，70％，皮肤消毒用，浓度过高会在菌体表面形成膜，影响乙醇进入菌体。 石炭酸，2％～5％溶液，用于器械和环境的喷雾消毒。 来苏尔，2％，较石炭酸刺激性小，用于皮肤消毒。 新洁尔灭，由5％原液稀释至0.25％水溶液采用杀菌作用，用于无菌室的喷雾消毒和皮肤，器械的表面消毒。 漂白粉，配成10％的水溶液，用于环境及发酵车间内的下水道、地沟等污染地段的消毒。 3.适用范围：只适合于无菌室或实验室的净化消毒灭菌，或用于发酵车间的环境消毒灭菌，而不能用于发酵工业生产设备和物料的消毒灭菌。 （二）辐射灭菌 1.利用高能量的电磁辐射和微粒辐射来杀灭微生物，如紫外。 2.紫外线对营养细胞和芽孢均有杀灭作用，但穿透力很低，只适用于无菌室的环境空间及表面的消毒，简单易行。 3.用于灭菌的射线还有X射线、γ射线等，它们含有的能量极高（波长为0.1～1.4?），被菌体吸收后，使菌体内的水和有机物产生强烈的离子化反应，形成OH-、过氧化氢和有机过氧化物。这些过氧化物能阻碍微生物的代谢活动而导致菌体迅速死亡。X射线的穿透力极强，因不经济，同时其辐射是从一点向四面八方放射，不适用于大生产。 这些方法不适合发酵生产。 (三)干热灭菌法 1.利用火焰和热空气进行灭菌的方法。 2.电热烘箱，在150～170℃下维持1～2小时，细胞成分发生氧化、细胞蛋白质变性、电解质浓缩等效，其中导致微生物死亡的主要作用是氧化。 适用于工业要求为灭菌后能保持干燥状态物料的灭菌 ，棉塞，金属制品，玻璃器皿等。 3.灼烧，是一种最彻底的干热灭菌方法，但它只能用于接种环、针、钩，试管口，三角瓶口等少数对象的灭菌。种子罐（小型罐）接种时火焰保护开口接种。 4.虽简单有效，但不能用于发酵生产的消毒灭菌。 表4-1干热灭菌温度和时间的关系 表4-2常见微生物的温度系数（Q10） (四)湿热灭菌法 湿热灭菌是直接用饱和蒸汽进行灭菌。 （1）为何在相同温度下湿热比干热灭菌效果好？ ①蛋白质凝固所需的温度与其含水量有关，含水量愈大，发生凝固所需的温度愈低。湿热灭菌的菌体蛋白质吸收水分，因而较同一温度的干热空气中易于发生不可逆凝固。 ②温热灭菌过程中蒸气放出大量潜热，因而湿热灭菌比干热所要温度低，如在同一温度下，则湿热灭菌所需时间比干热短。 ③湿热的穿透力比干热大，使深部也能达到灭菌温度。 发酵工业中处理大量培养基时广泛采用湿热灭菌。 用蒸汽加热的方法对培养基灭菌的要求是: A.达到一定的灭菌程度 B.尽量减少营养成分的破坏 2.微生物的热死规律－对数残留定律 某些分子的分解和分子内部的重新排列的反应属于单分子反应。 杂菌虽然是一个复杂的高分子体系，但其受热被杀死，主要原因是高温能使蛋白质变性，这种反应属单分子反应，因此杂菌在一定温度下受热死亡也遵循单分子反应方程。 3.菌体死亡速率常数与灭菌温度的关系 　 K——菌死亡的速度常数（1／秒） A——频率常数（1／秒） R——气体常数（1.987×4.817焦／开／摩尔） T——绝对温度（开） E ---- 反应所需活化能（焦／摩尔） 4.培养基灭菌温度的选择（为何要高温瞬时灭菌？） 培养基成分破坏也可看作一级反应，同样遵循： 灭菌时，温度由T1升高到T2，灭菌速率常数k变化如下， 5.理论灭菌时间的确定 （1）从公式可以看出，若要N=0时，t=∞，即灭菌后绝对无菌在实际工作中是不可行的。因此，工程设计时常采用N=0.001（个/罐），即灭菌1000罐中只残留一个活菌数，可满足生产要求。 6.影响培养基灭菌的因素 （1）pH值的影响 pH值对微生物的耐热性影响很大，pH为6.0～8.0时微生物最不易死亡， pH 6.0时