[工学]第3章动植物细胞培养.ppt

紫杉醇(Paclitaxel)是继阿霉素和铂类抗癌药之后本世纪后期最受人们重视的一种抗癌新药，是一新发现的有丝分裂抑制剂，其作用机理在于阻止微管正常生理聚集，抑制癌细胞的有丝分裂和纺锤体的形成，从而使癌细胞的复制受到阻断而凋亡。 1967年美国化学家Wall和Wani等首先从太平洋紫 杉（短叶红豆杉，Taxus. brevifolia）树皮中提取出来。该药于1990年进入Ⅲ期临床试验， 1992年底获美国FDA批准上市。 紫杉醇存在于红豆杉属植物的树皮、叶及茎中， 其中树皮中的含量最高，大约从12000株成年紫杉树中才能提取1KG的紫杉醇，而且紫杉的生长周期很长，在世界分布很少。 紫杉醇的国际市场价格为450美元/g 日本有关组织从红豆杉中诱导产生愈伤组织，筛选得到细胞培养4周就增殖了5倍，紫杉醇的含量达到了0.05％，比树皮中紫杉醇的含量高达10倍。 Ketchum从6种紫杉醇属植物中进行愈伤组织的诱导，获得了产生紫杉醇的高产细胞株，在悬浮培养下，细胞内的紫杉醇含量超过了20mg/L。 清华大学化工系生物化工研究所通过固液两步培养法可以在4周内获得20g/L干物质，利用代谢调控技术在2~3天内将紫杉醇的含量提高到0.063%左右。 2、利用植物细胞培养生产天然色素—紫草宁 紫草宁可用作创伤、烧伤以及痔疮的治疗药物，同时又因为其漂亮的紫红色而作为高级色素使用。 紫草宁产生于亚洲的多年生 植物紫草的根部 。但紫草资源严重不足，在日本，紫草已濒临灭绝，在我国，紫草（Arnebia euchroma)列入了国际二级保护植物 紫草的人工栽培成活率低，而且直接提取紫草宁的无法满足市场需求。 化学合成紫草宁的工艺非常复杂，且最终产率只有0.7％，生产成本昂贵。 紫草宁在国际市场上售价高达7000美元/kg 日本在1983年进行紫草细胞大规模培养来生产紫草宁。 我 国南京大学等从1986年开始对该项目进行研究，在进行大量的研究之后得出， 在适当的条件下，培养的紫草细胞悬浮物中紫草宁含量占干重的14%，比紫草根中 的含量高10倍。 植物细胞培养工业化存在的问题 生长缓慢 不耐受剪切力 培养细胞不稳定等 次级代谢物含量低 多数产物积累于胞内 一般的说，只有当次级代谢产物的价格高于1000美元/kg时，才考虑采用植物细胞培养方法。 动植物细胞培养和微生物培养的比较 比较项目 微生物 哺乳动物细胞 植物细胞 大小 1－10μm 10－100μm 10－100μm 悬浮生长 可以 多数细胞需贴壁生长 可以,但易成团,无单个细胞 营养要求 简单 非常复杂 较复杂 生长速率 快，倍增时间为0.5-5小时 慢，倍增时间为15－100小时 慢，倍增时间为24－74小时 代谢调节 内部 内部、激素 内部、激素 动植物细胞培养和微生物培养的比较（续） 比较项目 微生物 哺乳动物细胞 植物细胞 环境敏感性 能忍受广泛范围 非常敏感，仅忍受很窄范围 能忍受广泛范围 细胞分化 无 有 有 剪切力敏感 低 非常高 高 传统变异、筛选技术 广泛使用 不常使用 有时使用 细胞或产物浓度 较高 低 低 复习题 1、简述动、植物细胞培养的特点与难点，并与微生物细胞培养相比较。 2、比较动物细胞培养和植物组织培养所用的培养基的成分的异同. 3、影响植物细胞培养中次生代谢产物积累的因素有那些？ * 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。 在动物细胞培养过程中， 为什么要用胰蛋白酶对取出的动物 组织进行处理？ 胰蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的胶原纤维和细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞。 为什么不用胃蛋白酶？胰蛋白酶最适PH值为7.2 — 8.4胃蛋白酶最适PH值为1.5左右动物细胞培养最适PH值为7.2 — 7.4 * 1.同一种属不同部位的细胞也不相同，分裂期受培养条件的影响如温度、酸度、成分等， 2.大多数二倍体细胞的生长都需在一定的基质上贴附，伸展后才能生长繁殖，机制并不清楚，当细胞在基质上分裂增殖，逐渐汇合成片时，即细胞与周围细胞接触时，细胞就停止增殖! 接触抑制，若细胞转化成异倍体后，该抑制可解除。 3.在培养基中加入表皮生长因子或经自然和人为的因素转为异倍体后该细胞可转变成无限细胞系，更适合于工业生产。 4.这是由于动物细胞没有细胞壁的保护，所以更敏感。 * * 提高了细胞培养的可重复性，避免了血清差异所带来的细胞差异；减少了由血清带来的病毒、真菌和支原体等微生物污染的危险；供应充足、稳定；细胞产品易于纯化；避免了血清中某些因素对有些细胞的毒性；减