综合实训一L-胱氨基酸的制备4学时.DOCVIP

综合实训一 L-胱氨基酸的制备考核试题答案 1.胱氨酸的物化性质是什么，通常提取胱氨酸选用什么原料? 胱氨酸呈六角形片状白色洁净或洁净粉末，无味，微溶于水，不溶于乙醇及其他有机溶剂，易溶于稀酸和碱液中。在热碱液中易分解。胱氨酸的等电点（pI）为4.6，熔点为260～261℃。胱氨酸存在于人发、猪毛、羊毛、马茂、羽毛及动物角等的蛋白质中，其中人发含量最高，达17.6%。 2.提取胱氨酸时应注意什么条件变化？ 要注意温度和pH的变化。水解升温到100℃开始记温，每隔0.5h记温一次，在1～1.5h内升温至110℃左右（即罐温）。用硫酸调节pH值时，应用酸度计边测边调。保证其准确性。 3.胱氨酸制备的原理？ 胱氨酸是氨基酸中最难溶于水的一种，因此可利用这种特性，通过酸水解，从废杂猪毛、人发、鸡毛、羊毛等角蛋白中，分离提取胱氨酸。 4．如何判断水解终点？ 水解终点的判定，加入10%氢氧化钠溶液2mL，在滴加硫酸铜溶液几滴，摇匀后，如仍有明显的天蓝色表明水解完全。 综合实训二：树脂柱纯化法制备谷光甘肽考核试题答案 1. 绘制出GSH标准曲线能否快速确定滴定值的大小？如何绘制出GSH标准曲线? 取5 mL待测样品，置于250 mL锥形瓶内，加入5 mL 2％偏磷酸溶液，1 mL 5％碘化钾溶液和2滴淀粉指示剂，用0.001 mol／L的碘酸钾溶液滴定至溶液由无色变为蓝色止。 2.提取时为何加热后又要速冷？ 防止还原性谷胱甘肽在高温下被氧化。 3.树脂柱的装柱操作要点？ 将市售732阳离子交换树脂磨碎，筛选出60～80目。物理方法处理后，先以4倍树脂体积的2mol／L盐酸搅拌浸泡2h，反复用水洗至近中性后，再用4倍体积的2mol／L氢氧化钠溶液搅拌浸泡2h，反复用水洗至近中性后，再用4倍树脂体积的2mol／L盐酸搅拌浸泡2h，最后水洗至中性。按要求装柱后用1 mol／L硫酸平衡备用。 4.怎样收集洗脱液中目的组分？ 抽提液上732阳离子交换树脂柱，流速6 mL／min，然后用1 mol／L硫酸洗脱，洗脱流速2 mL／min,25 min左右开始收集5mL流出液,进行快速含量测定,当流出液滴定值超过0.2 mL／mL时，开始收集，滴定值低于0.2 mL／mL时停止洗脱。 综合实训三：锌盐沉析法提取胰岛素考核试题答案 1.为何在胰岛素的制备中溶液的pH值不能超过8.0 因为胰岛素在弱酸性水溶液或混悬在中性缓冲液中较为稳定；pH值超过8.0会造成胰岛素的不稳定。 2.碱化过滤时为何加硅藻土？ 碱化过滤时为何加硅藻土的目的是，利用硅藻土吸附物质的能力，使硅藻土做为惰性助滤剂辅助快速过滤。 3．在胰岛素制备过程中，为何选择氯化锌为沉析剂？ 根据胰岛素易与锌离子结合的性质，用氯化锌作沉析剂，可使胰岛素直接从初步除去碱性和酸性杂蛋白的提取液中沉淀析出。 4．胰岛素具有哪些性质？ 其等电点为5.30～5.35，在pH4.5～6.5范围内几乎不溶于水，易溶于稀酸或稀碱溶液；在80％以下乙醇或丙酮中溶解；在90％以上乙醇或80％以上丙酮中难溶；在乙醚中不溶；在弱酸性水溶液或混悬在中性缓冲液中较为稳定。胰岛素具有蛋白质的各种特殊反应。 综合实训四：DNA制备考核试题答案 1.为什么所用离心管等器皿必须灭菌？蔗糖密度梯度在离心中起什么作用？蔗糖密度梯度在大的离心力作用下，不同的NA 由于其大小、形状和密度不同，而悬浮在不同密度的位置上，从而达到分离 2．根据紫外吸收光谱分析所制备的卵磷脂的纯度。 将一定量卵磷脂样品溶于无水乙醇，配成0.1％乙醇溶液，用紫外分光光度计扫描其在90-400nm的吸收光谱，可测得卵磷脂的紫外最大吸收峰。卵磷脂紫外最大吸收峰在215nm波长。如果有偏移或者有其他吸收峰存在证明有杂质。 3．蛋黄中制备卵磷脂时，选用氯化锌有什么样作用？ 氯化锌是一种金属盐沉淀剂，可以将卵磷脂从溶液中分离出来，由此除去蛋白质、脂肪等杂质。 4．蛋黄中制备卵磷脂时，选用丙酮有什么样作用？ 利用卵磷脂不溶于丙酮的性质，用丙酮从粗卵磷脂溶液中沉淀磷脂，能使卵磷脂与其他脂质和胆固醇分离开来。 综合实训七：银耳多糖制备及鉴定和含量测定考核试题答案 1．加入复合酶制剂有何作用？ 酶制剂的主要作用是酶解细胞壁和细胞膜，使银耳多糖能够释放出来。 2．CTAB络合法与乙醇沉析法分离银耳多糖有何异同？ 都是形成多糖的沉淀，乙醇沉析法主要是利用多糖在有机溶剂中溶解度小而沉淀析出。CTAB络合法主要是通过络合反应形成难溶于水的络合物进而沉淀析出。 3．为何在制备全流程中应时刻注意温度不能超过80℃？ 反应式：