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  • 2018-02-24 发布于河南
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DNA提取方法总述

细菌基因组DNA提取方法综述 来源:易生物实验 浏览次数:444网友评论 0 条 细菌基因组DNA的提取方法综述,提供了5种方法。 关键词:基因组细菌方法 细菌基因组DNA的提取方法综述,提供了5种方法。 1 快速微量提取法 A.取1.5ml菌体培养物于一灭菌Ep管中,12000rpm离心1min, 丢去上清夜,收集菌体。 B.加入400ul裂解液(40mMTris-醋酸,20mM醋酸钠,1mMEDTA,1%SDS,pH7.8)混匀,置于37oC水浴1hr。 C.然后加入200ul5mol/L的氯化钠溶液,混匀后于13000rpm离心15min。 D.取上清液,用苯酚抽提2次,氯仿抽提1次。 E.加两倍体积无水乙醇,1/10体积醋酸钾(3M ,pH8.0),-20度保存1小时后,13000rpm离心15min,弃上清液,沉淀用70%乙醇洗2次;置于室温干燥后,溶于50ulTE溶液中,置4保存备用。 2 蛋白酶/SDS法制备 先用10ml含适当抗生素的GBM过夜培养Delftia sp.,第二天4000rpm离心10min收集菌体,用Washing TE(50mmol/LTris-HCl pH8.0,10mmol/LEDTA pH8.0)洗菌体2次,之后将菌体充分悬浮在5ml 1×TE缓冲液中,先后加入0.5ml 5mg/L的蛋白酶、0.5ml 10% SDS,轻轻混匀后50

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