以沙拉脫為介質粗萃取植物組織中的染色體.docVIP

PAGE PAGE 11 以沙拉脫為介質粗萃取植物組織中的染色體 一、研究動機 生物課本中時常談到染色體，不知道染色體的長相如何？便跑去請教生物老師，有什麼方法可以迅速萃取出染色體？在老師的指導下我們進行了一連串有趣的實驗。 二，研究目的 以沙拉脫為介質萃取植物染色體的可行性。 那些植物組織較容易取的植物染色體。 染劑對染色體判定的幫助。 三、實驗器材與藥品 研缽和杵 乳頭滴管 10mL量筒 50mL燒杯 複式顯微鏡 小刀 食鹽 95% 藥用酒精 透明的沙拉脫 洋蔥 甘藷 馬鈴薯 綠豆 花生 上皿天平 玻璃棒 紗布 漏斗 亞甲藍液 1M硝酸 四、實驗步驟 秤取58.5克食鹽加水500mL溶解成2M食鹽水。 將一瓶95% 藥用酒精放入冰箱中冷藏備用。 分別將植物不同的組織切取2克備用。 實驗流程如下 2克組織切碎，放入研砵中 　 加入5mL 2M食鹽水+5滴沙拉脫 磨碎組織 5層紗布過濾 濾液加5mL冰凍的95% 藥酒精 加入5mL 2M食鹽水再溶解 沉澱物產生 絲狀物出現 玻璃棒輕輕捲起絲狀物 取得染色體 五、實驗結果與討論 (一)根據嘗試的各種材料，通常加入5mL食鹽水純化兩次，即可取得粗萃取的染色體。不像動物細胞必須先泡水.等細胞脹破後才能進行萃取，時間節省很多。(見照片一)。 (二)染色體位在細胞內，必須弄破細胞才能取得染色體，植物細胞利用研磨或攪碎的方式破壞細胞。 (三)染色體是由鹼基、核糖、磷酸所組成的去氧核糖核酸。通常會纏繞在組織蛋白上。沒有加沙拉脫的萃取液，常會因蛋白質溶與水形成黏稠性的泡沫，干擾到染色體的撈取。 根據參考資料可以得知1.2M食鹽水是最適合的溶劑，食 鹽水會使核酸和蛋白質的連結斷裂，核酸上附有的鹽基會溶解在食鹽水中(見照片二)，但是蛋白質溶解在水中會形成泡沫，不容易觀察到粗萃取的染色體。我們加入沙拉脫的用意是利用非極性的碳鏈包圍蛋白質和脂質再溶於水中。既可以加速核酸與組織蛋白的分離，也可以避免泡沫的干擾。加入95%的藥用酒精置換出溶於食鹽水中的核酸。加上低溫作用使溶解度降低，讓染色體更容易析出。(見照片三)。 表一、各種組織粗萃取的結果 組 織 名 稱 萃 取 結 果 洋 蔥 鱗 葉 效果良好，染色體呈絲狀旋聚在一起 洋 蔥 根 尖 效果良好，有索狀的染色體 馬鈴薯塊莖髓部 混雜許多澱粉顆粒，染色體呈絲狀，溶液易氧化變色 馬鈴薯塊莖表皮 片段絲狀染色體，數量很少 甘藷塊根髓部 效果良好，染色體呈絲狀混有植物纖維 甘藷塊根表皮 少許絲狀染色體 發芽中的綠豆種子 效果很好，量多，有索狀染色體 桂花嫩葉 絲狀色體混有少許葉綠體 桂花老葉 效果不好，酒精會溶解很多葉綠體使染色體看不清楚 照片一：植物粗萃取染色體所需器材 照片二：粗萃取的染色體成白色沉澱 根據我們實驗結果，只要植物較柔軟的組織均容易萃取出染色體，正分裂中的細胞如根尖、發芽的種子均容易萃取到索狀染色體。較老的組織則取得的染色體較呈片段(見照片四a～h) 照片三：上圖未加沙拉脫粗萃取的染色體 下圖加沙拉脫粗萃取的染色體比較明顯 a：洋蔥鱗葉粗萃取的染色體；放大100X b：洋蔥根尖粗萃取的染色體；放大100X c：馬鈴薯塊莖髓部粗萃取的染色體；放大100X d：馬鈴薯塊莖表皮粗萃取的染色體；放大100X e：甘藷塊根髓部粗萃取的染色體；放大100X f：甘藷塊根表皮粗萃取的染色體；放大100X g：發芽中的綠豆種子粗萃取的染色體；放大100X h：萃取到的片段染色體；放大100X 照片四：各種組織粗萃取的染色體 照片五：上圖加亞甲藍液染色的粗萃取染色體 下圖加1M硝酸染色的粗萃取染色體 利用亞甲藍液和1M硝酸溶液染色，會使得片段的染色體聚集在一起，更容易