欧易生物.PDF

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2018-02-28 发布于天津
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欧易生物

甲基化检测技术比较欧易生物甲基化研究技术甲基化检测 DNA 甲基化的检测大体分为两个步骤： a ．待检测样品的前期处理； b．目标序列的定位和甲基化状态的量化。甲基化的前期处理 • 重亚硫酸盐修饰 • 甲基化特异性内切酶 • 蛋白或抗体富集重亚硫酸盐修饰 5 甲基化特异性内切酶蛋白或抗体富集 MeDIP: Methylated DNA Immunoprecipitation MeDIP 全基因组甲基化分析 • 甲基化芯片(Illumina /Agilent) • 甲基化免疫共沉淀测序(MeDIP-seq) •亚硫酸氢盐处理测序(Bisulfite Sequencing ） 9 甲基化芯片 --亚硫酸盐修饰 CH 3 ggggagCagCatggagCCttCGgCtgaCtggCGtggCCa top strand CCCCtCgtCgtaCCtCggaaGCCgaCtgaCCGCaCCggt bottom strand CH 3 亚硫酸盐转化 CH 3 ggggagUagUatggagUUttCGgUtgaUtggUGtggUUa top strand UUUUtUgtUgtaUUTUggaaGCUgaUtgaUUGUaUUggt bottom strand CH 3  处理后上下链不再互补  针对转化后的序列设计芯片探针 10 Infinium技术检测甲基化 --单碱基延伸原理 11 HumanMethylation27K • 27，578个CpG位点 • 涵盖了14，475个RefSeq基因，注释过的基因12，833个 • 144个已经确认的癌症基因的甲基化位点,982个文献报道过的癌相关基因的位点 • 200个存在于CpG岛上 • 110个探针分布于miRNA启动子区域 12 HumanMethylation450K • 450,000个CpG位点 • CpG岛或CpG shores位点； • CpG岛外的CpG位点； • 在人类干细胞中观察到的非CpG岛甲基化位点； • 肿瘤与正常组织相异的甲基化位点，包括多肿瘤及不同的组织类型；