转录(transcription).ppt

转录 (transcription) －从DNA到RNA;OUTLINE;基因表达;编码链(coding strand,有义链sense strand)：与mRNA序列相同的DNA链。 模板链(template strand,反义链antisense strand)：根据碱基互补原则指导mRNA合成的DNA链。;基因转录为RNA;mRNA(messenger)：编码特定蛋白质序列 tRNA(transfer)：特异性解读mRNA中的遗传信息，将其转化为相应氨基酸后加入多肽链中 rRNA(ribosomal)：直接参与核糖体中蛋白质合成;3.1 RNA转录概述;三种RNA-tRNA、rRNA、mRNA都由基因转录而成，然后mRNA翻译成蛋白质，最后组装成功能蛋白。;RNA的转录;转录起始于RNA聚合酶和启动子(promoter)结合之后，转录起始的第一个碱基称为转录起始点(start point) 。在RNA聚合酶的作用下合成RNA，至终止子(terminator)终止。 由启动子到终止子之间的序列称为转录单位(transcription unit)。转录起始点前面的序列称为上游(upstream)，后面的序列称为下游(downstream)。;3.1.2 转录的延伸;3.1.3 转录的终止;3.2 转录机器的主要成分;3.2.1大肠杆菌RNA聚合酶;大肠杆菌RNA聚合酶;大肠杆菌RNA聚合酶;大肠杆菌RNA聚合酶;3.2.2 真核生物RNA聚合酶;真核生物RNA聚合酶II;真核生物RNA聚合酶II的大亚基;真核生物RNA聚合酶II的小亚基;真核生物RNA聚合酶I;真核生物RNA聚合酶I的亚基;真核生物RNA聚合酶III;Comparison of eukaryotic and prokaryotic RNA polymerases;3.3 原核生物基因的转录;原核生物基因转录过程;1、启动子的基本结构;1、启动子的基本结构;典型启动子的结构; ;2、原核生物基因启动子的结构;2、原核生物基因启动子的结构;2、原核生物基因启动子的结构;2、原核生物基因启动子的结构;葡萄糖效应(正调控)：在葡萄糖减少时，腺苷酸环化酶ACase使ATP转变为cAMP(环腺嘌呤核苷酸)。 cAMP与其效应蛋白(代谢物激活蛋白)CAP结合成复合物，然后与lac启动子上的CAP位点结合，这样lac启动子被正调控因子活化，继而被RNA聚合酶识别。;lac启动子上有两个CAP结合位点： 位点I位于-70—-50，有反向重复序列，位点II位于-50—-40； cAMP-CAP复合物首先结合于位点I，从而提高了位点II结合cAMP-CAP的能力(协同效应)； 一旦位点II被cAMP-CAP占据，RNA聚合酶很快识别、接触-35区，然后再与-10区结合。;3、增强子及其功能;增强子作用机理;四个阶段： 识别。核心酶在σ因子参与下接触和识别DNA启动子区域（-35区）。 结合。完成从非特异性结合转变为特异性结合的过程；RNA聚合酶（α亚基）与启动子（-10区）特异性结合，形成封闭起始复合物。;RNA聚合酶全酶在转录起始区的结合 ;从封闭性转变为开放性起始复合物。酶结合在-10区时，启动子活化，并解开双链结构，暴露模板链； 形成三元起始复合物。酶移动到转录起始位点，在起始位点加上第一个核苷三磷酸，转录开始。;使RNA聚合酶识别启动子。保证RNA聚合酶特异性、稳定地结合到基因的启动子序列上，而不结合到其它非特异性、低亲和性的位点上。 使RNA聚合酶特异性结合启动子。RNA聚合酶全酶首先进入自由卷曲的DNA作迅速的相对运动，与非特异性位点相遇，通过接触、解离、再接触，沿DNA链迅速移动，酶分子在DNA上搜索启动子，当σ因子发现其识别位点时，全酶就与-35区结合。;RNA聚合酶结合在转录起始位点上游 -50-+20附近的一段DNA区域。 σ因子帮助发现其识别位点，全酶就与-35区接触(初始结合)，形成封闭型启动子复合物。;全酶一端与-35区接触，另一端可以达到-10区，整个分子向-10区移动，并与之牢固结合，然后在-10区及起始位点处发生局部解链，这时全酶与启动子复合物形成开放型启动子复合物。;-35区的功能主要是提供RNA聚合酶的识别信号，寻找启动子并形成松散结合的封闭型复合物； -10区的功能主要是使启动子复合物从封闭型转变为开放型，RNA聚合酶在开放型复合物中更紧密地结合成二元复合物。;DNA从-10区向转录起始位点发生局部解链，形成17个核苷酸的开链区； DNA开链是正确引入核苷酸底物的必要条件，这时第一个底物NTP依靠与模板链的互补原则进入β亚基（催化活性中心）中起始位点部位。;转录起始位点两侧DNA没有固定的序列模式，关键是酶与-10区的结合，决定了起始位点第