微生物检测培训课件.ppt

1.样品预处理 检测流程 操作步骤 说明 (1) 以无菌操作方法称取预处理样品置225 mL生理盐水罐内 （1）称量样品时，尽量将样品剪碎，利于样品均质液的制备 （2）天平读数接近时，应慢慢加入预处理样品，避免过量 (2) 以无菌操作，将均质杯中的预处理样品混合液倒入均质袋中 在打开均质袋的时候，不要触碰到均质袋内壁，避免内壁沾染外来细菌 (3)用拍击式均质器拍打1～2 min，制成1:10的样品匀液 （1）拍打前一定要将均质袋中空气排净，避免影响拍打效果 （2）拍打前要将均质袋放置在拍打器中央的部位，保证拍打均匀 （3）均质袋口应折叠两次，避免拍打时均质液从袋口溢出 * 检测流程  2.10倍稀释液的制备 （1）在无菌生理盐水管上标记稀释倍数，并从每个稀释度分别吸取1 mL空白稀释液加入一个无菌平皿内作空白对照 （2）在培养皿外圈标记操作时间，操作人及稀释倍数，并标记空白 （3）以无菌操作方法，用1mL 无菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL 稀释液的无菌试管中 （4）振摇试管，无菌操作，换用1支无菌吸管反复吹打?样品匀液使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液 (5)按上述操作程序，以此类推，连续稀释，制备10 倍系列稀释样品匀液（例如10-3、10-4倍稀释液）。 ?[ * 蛋糕的菌落总数的检测 检测流程 操作步骤 说明 （1）选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液，进行样品匀液的加入 将样品匀液加入到灭菌培养基的操作在无菌环境中进行 （2）以无菌操作，在进行10倍递增稀释后，按稀释倍数吸取1mL样品匀液加入无菌平皿内，每个稀释度做两个平行平皿 操作要迅速，以保证在20min内完成多个稀释度样品匀液的加如，在捡样加入平皿后，应在20min内倾注培养基，这样可防止细菌增值和片状菌落的产生 3.将样品匀液加入灭菌培养皿 * 蛋糕的菌落总数的检测 检测流程 将15mL～20mL 冷却至的平板计数琼脂培养基（可放置于46℃±恒温水浴箱中保温）倾注平皿，转动平皿使其混合均匀 （1）在20min内加完所有样品匀液，开始倾倒培养基，避免产生片状菌落 （2）加入混合培养基时，可将皿底在平面上先前后左右摇动，再按顺时针和逆时针方向旋转，以使其混匀 （3）混合过程中要小心，避免培养基溅到皿边及上方，造成外溢 待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±培养24 h±2 h 平皿内琼脂凝固后，在数分钟内即应将平皿翻转，进行培养，这样可避免菌落蔓延生长 4.倒入培养基 5.培养 * 任务实施 1. 操作准备 2. 独立完成检测任务 3.无菌操作技术 4. 场地清理 * 任务4 食品中大肠菌群的检测 * 任务描述 岗位：质监局微生物检验员 职责：食品的大肠菌群检验 任务：米果大肠菌群检验 * 任务分析 一 检测意义 大肠菌群是作为粪便污染指标菌 大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一 二 检测方法 GB4789.1-2010 食品微生物学检验 大肠菌群计数 方法1: MPN计数法 方法2：大肠菌群平板计数法 * 学习目标 知识目标： 1.大肠菌群检测意义 2.大肠菌群检测方法 技能目标： 1. 熟练无菌操作技术 2. 熟悉大肠菌群检测流程 素质目标： 1. 严谨工作意识 2. 环保意识 * 相关知识 一 .大肠菌群 与粪便污染有关的细菌 需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖、产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。 * 二.检测方法 MPN值法：每1g或1mL样品内大肠菌群近似数。 　MPN 为最大可能数的简称。这种方法，对样品进行连续系列进行稀释，加入培养基进行培养，从规定的反应呈阳性管数的出现率，用概率论来推算样品中菌数最近似的数值。 相关知识 * 设备材料 设备：恒温培养箱、冰箱、恒温水浴箱、超净工作台、天平、振荡器、均质器 培养基与试剂：LST（月桂基硫酸盐胰蛋白胨）、BGLB （煌绿乳糖胆盐) * 初发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管LST（月桂基硫酸盐胰蛋白胨）发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。 复发酵试验：将产气发酵管培养物转种于煌绿乳糖胆盐（BGLB)管中，36±1℃培养18-24h，产气者，记为大肠群群阳性。 菌数报告：按照 LST 阳性管数根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告每100ml（g）大肠菌群的MPN值。 检测流程 * 检验程序 检 样 25g(mL)样品+225mL稀释液，均质 10倍系列稀释 选择适宜3个连续稀释度的样品匀液，接种至 月桂基硫酸盐胰蛋白