一种快速提取棉花干种子基因组DNA的新方法精品.pdf

花 学 报 Cotton Science 20 14 26 渊1冤院87~94 种快速提取棉花干种子基因组DNA 的新方法 需勇 刘伟霞 杨亮 周文华 吴建功 别传述* 湖北惠民农业科技有限公司袁 北武汉430070 冤 摘要院利用SSR(Simple sequence repeats)分子标记技术袁能够快速有效地进行杂交棉纯度鉴定遥 为了攻克SSR 分子标记技术中存在的技术难关袁 本文专门对棉花干种子胚的基因组DNA 提取方法进行了研究遥 利用该方 法袁只需要2 次加液尧1 次离心袁从基因组DNA 提取到SSR-PCR 扩增袁最后电泳袁进行谱带分析袁整个过程仅 需4.5 5 h遥 本方法成本低尧速度快尧操作简单袁适用 批量化DNA 的提取袁且整个提取过程无毒尧无污染袁是 一种资源节约型和环境友好型的高效提取方法袁适用 大批量样本的SSR 分子标记鉴定工作遥 关键词院棉花曰胚曰SSR 曰基因组DNA 中图分类号院S562.035.3 文献标志码院A 文章编号院1002-7807(2014)01-0087-08 Lang Xuyong, Liu Weixia, Yang Liang, Zhou Wenhua, Wu Jiangong, Bie Chuanshu* ( 430070 ) SSR (simple sequence repeats) molecular marker technology can quickly and efficiently identify the purity of hybrid cotton seeds. This study was aimed at overcoming technical difficulties of this technology and finding a genomic DNA extrac- tion technique from dry cotton seed embryo. This method requires only two fluid additions and one centrifugation. From genom- ic DNA extraction to SSR-PCR amplification, electrophoresis, and finally band-spectrum reading, the entire process requires on- ly 4.5 –5 h. The method has low cost, high speed, simple operation, and is suitable for mass DNA extraction. The entire extrac- tion process is non-toxic and non-polluting, so it is a resource-saving and environmentally friendly solution that could be used for large sample quantity SSR molecular marker work. cotton; embryo; SSR; genomic DNA 随着市场上 花品种的不断增加 而其遗传 高效尧快速提取是基本环节遥 目前已有多种DNA 基础又相对狭窄 使 花各品种间在形态学鉴定 提取方法 如CTAB(Cetrimonium bromide)[6] 尧SDS 上也越来越困难 导致棉花品种杂尧乱现象日益 (Sodium dodecyl sulfate)[7] 等方法可提取高质量尧 [1] 高产量DNA 遥 这些方法应用于SSR 作物辅助育 严重 从而对 花产量和质量造成了严重影响 遥 近年来 随着分子生物学和生物技术的发展 证 种或者杂交种纯度鉴定对大量样本进行分析 明SSR(Simple sequence repeats)分子标记技术应 时 要求基因组DNA 提取人员