选修3-1-2 基因工程的原理和技术.ppt

一、基因工程的基本原理： 是让人们感兴趣的基因（即目的基因）在受体细胞（宿主细胞）中稳定和高效的表达。 （2）目的基因的序列未知：用酶切法从基因文库直接获取 （五）、目的基因的表达 检测目的基因是否表达-----检测受体细胞中目的基因的产物。 总结3：基因工程的基本操作步骤： 取_____获取目的基因 组———形成重组DNA分子 导———将重组DNA分子导入受体细胞 筛———筛选含有目的基因的受体细胞（检测） 达———目的基因的表达 5、基因工程常用的受体细胞有[ ] ①大肠杆菌 ②枯草杆菌 ③支原体 ④动植物细胞 A ①②③④ B ①②③ C ②③④ D ①②④ 6、下列关于基因工程的叙述，正确的是[ ] A 限制性内切酶的切口一定是GAATTC碱基序列. B 一种限制性内切酶只能识别一种特定的核苷酸序列. C 目的基因就是指DNA质粒. D 只要检测出受体含有目的基因，目的基因就一定能成功地进行表达. D B * 第二节 基因工程的原理和技术 DNA重组技术的三件工具： 限制性内切酶、 DNA连接酶、 质粒。 总结 质粒 目的基因 限制性内切酶 连接酶 重组质粒 有关生物： 抗逆性、 优良品质、 生物药物 保健品、 毒物降解、 工业生产所需用酶 的基因。 获取 目的基因： 自然界 人工 （一）、获取目的基因 二、基因工程的基本操作步骤 2、获取方法： （1）目的基因的序列已知:化学合成法 1、目的基因： 主要指编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子。 反转录法 逆推法 A U C G U A A 目的基因的信使RNA 逆转录酶 T A G C A T T 单链DNA 酶 合成 T A G C A T T A T C G T A A 双链DNA 目的基因 蛋白质的氨基酸序列 推测 信使RNA核苷酸序列 碱基互补配对推测 结构基因的核苷酸序列 化学方法合成 目的基因 人的血红蛋白基因 人的胰岛素基因 逆推法： 利用PCR技术扩增 合引物成 解链 数量增加 PCR扩增仪 连接引物 目前常用方法 从基因文库中获取 基因文库 将含有某种生物的不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因。 基因组文库 部分基因库 某生物体内全部DNA 许多DNA片段 受体菌群体 限制酶 与载体 连接导入 基因组文库 某种生物某个时期的mRNA cDNA 反转录酶 受体菌群体 部分基因文库 （cDNA文库） 基因文库 与载体 连接导入 质粒 DNA分子 同一种限制酶处理 DNA连接酶 重组DNA分子；（重组质粒） （二）、形成重组DNA分子（重组运载体） (一）常用的受体细胞： 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 （二）导入受体细胞的原理 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 （三）、将重组目的基因导入受体细胞 （三）导入受体细胞的方法 Ti质粒 重组质粒 农杆菌 植物体细胞 表现性状 1、导入植物细胞 含外源基因的DNA 农杆菌侵染 （双子叶和裸子植物） 花粉管通道法 基因枪法 空气加速管 微弹 材料 注入DNA （单子叶植物） 1987年，周光宇（中国）的转基因棉花 显微注射仪 2、导入动物细胞 受精卵 如：原核生物： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少。 作为受体细胞。 如：大肠杆菌。 CaCL2 处理 重组质粒被吸收 3、导入微生物细胞 1、将目的基因导入植物细胞的方法 （1）农杆菌转化法（常用） （2）基因枪法 （3）花粉管通道法 2、将目的基因导入动物细胞 显微注射技术 提纯重组DNA 体外显微注射入受精卵 受精卵移植 3、将目的基因导入微生物细胞 用Ca2+处理细胞，增加细胞壁的通透性吸收重组DNA, 检测 DNA 标记 被标记的目的基因做为探针 提取 提供目的基因生物的正常基因组 杂交 （1）染色体DNA上是否插入目的基因-----DNA分子杂交技术 转基因生物 显示杂交带 （四）、筛选含目的基因的受体细胞（目的基因的检测） 检测 提取 被标记的目的基因做为探针 杂交 转基因生物提取的mRNA 显示杂交带 转基因生物 DNA 标记 （2）目的基因是否转录出mRNA -----DNA分子杂交技术 检测 提取 转基因生物 蛋白质 制备相应抗体 杂交 显示杂交带 （3）目的基因是否翻译成蛋