兰花组织培养技术研究精品.pptVIP

石戈和吴婷婷（2006）发现高压静电场促进舟山春兰愈伤组织的生长。 有研究测试了二氧化碳对兰属类原球茎增殖的效果，发现高浓度二氧化碳只有在低浓度蔗糖中才产生有益作用（吴应祥，1992）。 何篙等（1994）观察到乙烯抑制剂硝酸银可大大加快春兰和墨兰杂交种根状茎的分化频率。 * 蕙兰组织培养的主要步骤 原球茎诱导： 培养基为MS+NAA0.5mg/L+BA0.5mg/L+椰子汁100mg/L +蔗糖20g/L+琼6g/L脂.弱光下25摄氏度培养，3-4个月可见原球茎生长，初期为白色，置培养架上每天12小时，光强1500-2000lx，原球茎迅速转绿，不久伸长形成根状茎。 花径和花器官也可以作为外植体，花芽分化形成在生长停顿前采取最佳，NAA5-10mg/L，2,4-D0.2-1 mg/L * 增殖： 根状茎切割转入MS+NAA0.5-1mg/L+BA0.1-0.5mg/L +蔗糖30g/L+琼6g/L脂.置培养架上每天12-16小时，光强1500-2000lx， 25摄氏度培养,30-40天继代培养1次 * 分化： 把粗壮的根状茎切割1cm长段，MS+NAA0.1-0.5mg/L+BA2.5-3g/L +蔗糖30g/L+琼6g/L脂.置培养架上每天16小时，光强1500-2000lx， 25摄氏度培养,20天陆续分化成芽 * 成苗： 当芽高2cm左右时切割，转入壮苗生根培养基，未分化的根状茎转入增殖培养基继续继代培养，壮苗生根培养基为1/2MS+NAA2-3mg/L+BA0.2-1mg/L+香蕉泥100g/L +蔗糖20g/L+琼5g/L脂+AC 3-5g/L.25摄氏度培养，置培养架上每天16小时，光强2500-3000lx，幼芽不久分化生根，当试管苗高15cm以上，根3-5条时，可以炼苗移栽。 * 蝴蝶兰花梗培育过程 一、花梗腋芽培养 1、采用连花梗组织采芽法 2、采用不带花梗组织的采芽法 二、花梗节间培养 消毒后，将花梗节斜切成1-1.5mm的薄片，将薄片平置于VW+BA1-3mg/L+蔗糖20g/L的固体培养基中培养，进行原球茎诱导 * 1、先将整枝花梗用75%酒精棉球擦拭，切成约5cm的每节带芽小段，仔细除去苞片，以防伤及嫩芽，然后用2%次氯酸钠溶液消毒20min，其间不停的摇动，消毒后用无菌水冲洗3-5次，放在培养皿中。用解剖刀将两端被次氯酸钠漂白部分各1.5cm，将其插入培养基中，芽体朝上插接在 1/2MS+BA3g/L +蔗糖20g/L+水解乳蛋白1 g/L +琼8g/L脂+活性炭1g/L，pH为5.6的培养基上。 无菌苗可按以下方法切离： 一种将小芽切离花梗茎段，并横切为上下两段，分别接种培养。一种是将芽切离茎段，作为种苗接种增殖培养， * 分切花梗 灭菌消毒 接种到培养基 诱导出试管苗 去掉花梗 将试管苗植入试管 分化更多苗芽苗 分切植入更大管器 增殖分化更多苗芽 部分用于继代培养 部分用于育苗 * 采用不带花梗组织的采芽 剥离的腋芽首先接种在Hyponex 3g/L+NAA1-2 mg/L培养基中，自然增殖成团块，并分化出许多原球茎状芽，分割后可在Hyponex 3g/L+NAA1 mg/L+2,4-D0.1mg/L+ KT0.1mg/L， MS+NAA1 mg/L+BA5-10mg/L+液乳10%培养基中进行继带增值，生根成苗培养基： MS+BA0.1 mg/L+2,4-D0.1mg/L+ KT0.1mg/L * 建兰的组织培养 1花芽的采取和预处理：采用花枝茎节切断进行组织培养获得无性系。取当年生2-6cm长的幼嫩花茎，经流水冲洗，用0.1%Hgcl2消毒液浸泡8-10min，在超净工作台内仔细剥去外层包叶，将花枝切成1cm长的小段，每段带一茎节，然后浸入3%双氧水中浸泡消毒10min左右，无菌水冲洗3-5次，分别接种于培养基。 2花芽诱导原球茎或试管内开花：将花枝茎段接种在MS+NAA0.1-0.2mg/L+BA5mg/L+GA1mg/L+蔗糖20g/L+琼6g/L脂,腋芽继代在MS+NAA0.2mg/L+BA2mg/L+蔗糖20g/L+琼6g/L脂， * 大花蕙兰嫩芽的离体培养 * * 采用连花梗组织采芽法 * 采用不带花梗组织的采芽法 * 花梗节间培养 * 兰花组织培养技术研究 齐鲁兰苑 * 兰花组织培养三个关键期 1、原球茎的诱导 2、原球茎的继代培养（根状茎） 3、壮苗培养 * 1、洗涤、消毒 新玻璃器皿的洗涤：在1%HCL溶液中浸泡一昼夜，然后用水冲洗，再用肥皂水刷洗1次，反复用水冲洗，最后用少量蒸馏水冲洗1遍，晾干备用（通过洗涤除去对培养物有害的碱性物质和其他杂质） 用过器皿的洗涤：除去器皿中残渣，用清水冲洗，再用浸过肥皂水或合成洗涤剂的毛刷刷洗，用清水冲洗干净，最后用