罗非鱼细菌性败血症病原菌嗜水气单胞菌拮抗菌株的筛选-江苏农业科学.PDFVIP

江苏农业科学　２０１７年第４５卷第３期 — １２９— 李梦茜，张振旺．罗非鱼细菌性败血症病原菌嗜水气单胞菌拮抗菌株的筛选和鉴定［Ｊ］．江苏农业科学，２０１７，４５（３）：１２９－１３１． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１７．０３．０３６ 罗非鱼细菌性败血症病原菌嗜水气单胞菌拮抗菌株 的筛选和鉴定 １ ２ 李梦茜 ，张振旺 （１．河池学院化学与生物工程学院／广西高校微生物及植物资源开发利用重点实验室，广西宜州５４６３００； ２．湖南大学，湖南长沙４１００８２） 　　摘要：嗜水气单胞菌是动物和人类的致病菌，会引起水产动物败血症和人类腹泻病等，对我国已造成了巨大的经 济损失。采用细菌的分离、纯化和筛选等步骤，获得对嗜水气单胞菌引起罗非鱼败血症有抑制作用的菌株ＬＦＪＫ－１１， 并对其形态特征和生理生化特性进行分析。结果显示，该菌株属于链霉菌属。通过对其 １６ＳＤＮＡ比对及其系统进化 树构建，该菌株与链霉菌属相似性达到１００％，该结果与其形态特征和生理生化鉴定结果一致。 　　关键词：罗非鱼；嗜水气单胞菌；败血症；链霉菌；筛选；鉴定；形态特征；生理生化特征 ＋ 　　中图分类号：Ｓ９４３．１２５．４２９　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１７）０３－０１２９－０２ 　　嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）广泛存在于含水量 １．２．２　拮抗菌株的培养特征　选择拮抗性能最佳的菌株，并 丰富的土壤、淡水、污水、沼泽和粪便中，一部分是动物和人类 将其接种于蔗糖察氏、燕麦、无机淀粉、马铃薯、葡萄糖酵母膏 ［１－２］ 的致病菌，会引起水产动物败血症和人类腹泻病等 。嗜 培养基中，在２８℃下培养３～７ｄ，观察并记录待测菌在不同 水气单胞菌一直严重危害着水产动物养殖业和人类健康，已 培养基上的生长形态、基内菌丝、气生菌丝及色素。 ［３］ 造成了巨大的经济损失 。据不完全统计，我国每年水产动 １．２．３　生理生化特征的鉴定　测定纤维素水解、明胶液化、 ［４］ ［６］ 物养殖业因疾病造成的经济损失超过 １００亿元 ，可见水产 碳源利用、淀粉水解和ＨＳ产生等试验 。 ２ 养殖病害防治的任务十分艰巨。运用生物防治的手段筛选和 １．２．４　菌株 １６ＳｒＤＮＡ序列的测定及其系统发育树的构建 应用嗜水气单胞菌拮抗菌，应用于水产养殖，减少化学试剂的 　将菌株ＬＦＪＫ－１１接种在ＬＢ培养基上振荡培养 １２～１８ｈ， 使用，以减少水产养殖业的经济损失。 参照文献［７］的方法提取基因组ＤＮＡ。以ＤＮＡ组为模板，以 １６ＳｒＤＮＡ基因扩增通用引物进行 ＰＣＲ扩增，扩增出 １６Ｓ １　材料与方法 ｒＤＮＡ，其中引物序列为：２７Ｆ，５′－ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧ－ １．１　材料 ３′；１４９２Ｒ。５′－ＧＧＴＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡＣＧＡＣＴＴ－３′。用１％ 琼脂 指示菌为嗜水气单胞菌ＨＣＬＦ－２，由笔者所在实验室从 糖凝胶进行电泳分离，用 ＤＮＡ胶回收试剂盒纯化，然后直接 患败血症的罗非鱼中分离得到；以嗜水