康乃馨的离体快繁-生物技术专业植物组织培养开题报告教案.docxVIP

康乃馨的离体快繁开题报告 学生姓名：姜平阳 张骏驰 李凯 班 级：14生本2 专 业：生物技术 学 部：生物医药 指导教师：严铮辉二〇一七年三月一、实验目的掌握植物离体快速繁育原理、方法和完整过程。二、实验原理康乃馨又名香石竹,花色艳丽,开花时间长,装饰效果好,是世界上最畅销的切花之一,具有较高经济价值。由于病毒病侵害,常使植株矮化,花朵变小,花色产生斑点,退色甚至不开花,影响切花产量和质量。通过茎尖分生组织培养,能够获得“无病毒”的健康植株,对于引进的少而新的脱毒种苗,再进行一次茎尖培养,进一步降低基础苗中的病毒含量,并通过组织培养的方法快速繁殖,在短期内,就可以获得大量的脱毒试管苗,使引入材料迅速在生产上推广应用,取得明显的经济效益。三、实验仪器与材料：1.材料 康乃馨枝条2.仪器设备超净工作台，带有吸水纸的成套的培养皿，无菌水培养基 MS+1mg/L 6-BA剪刀，镊子量筒，酒精灯，滤纸，蒸馏水，小刷子纱布，棉塞，牛皮纸，标签纸，肥皂，酒精喷壶3.试剂95%乙醇，70%酒精，70%酒精棉球四、培养基的配方（1）香石竹的生芽培养基 MS+ IAA (0.1mg/L) + BA( 2.0mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖（30g/L）+琼脂(8g/L)，pH5.8-6.0,配制0.3L,用小培养瓶分装10~15瓶。 另外，需要制备无菌水20瓶（大培养瓶），每人3~4瓶，，纱布、碟子若干，后二者分别用报纸包好一同灭菌。（2）香石竹的继代培养基 MS+ BA( 0.3mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖（30g/L）+琼脂(8g/L), pH5.8-6.0,配制0.3L,用小培养瓶分装10-15瓶。 另外，需要制备无菌水20瓶（大培养瓶），每人3-4瓶，，纱布、碟子若干，后二者分别用报纸包好一同灭菌。（3）香石竹的生根培养基 MS+生根培养基为1/2MS+NAA(0.075mg/L)+蔗糖(30g/L)+琼脂(8g/L)，pH5.8-6.0,配制0.3L,用小培养瓶分装10-15瓶。 另外，需要制备无菌水20瓶（大培养瓶），每人3-4瓶，纱布、碟子若干，后二者分别用报纸包好一同灭菌。实验步骤1.灭菌（1）实验室及超净台消毒先进行无菌室内消毒，用紫外线照射30-45分钟，地面消毒，紫外灯关闭约20min后方可进去工作。对超净工作台进行消毒，开启无菌风开关，开启紫外，让无菌风吹上15-20min后方可工作。并用70%的酒精棉台擦净工作台（2）外植体灭菌取从市场上购买的康乃馨枝条，去掉大的叶片，剪取带腋芽的节结，用肥皂（洗洁精）清洗表面，再用自来水冲洗30-60s，然后在无菌室（超净工作台）内用70%酒精浸没20-40秒（根据材料的木质化程度掌握具体的浸没时间）。用0.2%的次氯酸钠溶液浸泡10-15min,再用无菌水冲洗3-4次，放入已灭菌的培养皿中的滤纸上待用。2.接种 接种时先点燃酒精灯，镊子和剪刀都要先浸泡在70%的酒精溶液中。用酒精灯上灼烧好的镊子、剪刀取出一个侧芽或小段茎，迅速打开三角瓶口，将材料插入瓶内，注意材料上下端的极性，不能倒插。在酒精灯边塞回锡箔纸，用记号笔在标签纸上写明材料、日期、实验人姓名，并将标签贴在相应试剂瓶上。培养条件 25℃光照13h/天，光照1000lx。继代培养：（1）无菌操作准备 将培养基及各种接种用具放入超净工作台，开紫外灯，照射消毒20-30min,开送风开关，关紫外灯，通风10min后，打开照明日光灯。洗手，用纱布吸取75%酒精擦手，擦拭超净台，擦拭培养基和无菌水瓶，点燃酒精灯，镊子、解剖刀、剪刀等接种工具灼烧灭菌，待冷却后使用。2）无菌操作接种酒精灯火焰旁打开香石竹芽苗培养基，用镊子取出香石竹芽苗，置于无菌培养皿，用解剖刀将芽苗簇切割成含2~3芽苗，然后切去芽苗的上端。（3）培养将培养瓶表面用酒精擦拭消毒，置于培养室进行光照培养。整理、清洁超净工作台。（4）观察记录定期观察培养情况，包括观察日期、生长情况、以及污染情况等，并做好记录。诱导生根：用低浓度的吲哚乙酸或者萘乙酸或无激素的N6培养基诱导（1）无菌操作准备将培养基、无菌水、及各种接种用具放入超净工作台，开紫外灯，照射消毒20-30min,开送风开关，关紫外灯，通风10min后，打开照明日光灯。洗手，用纱布吸取75%酒精擦手，擦拭超净台，擦拭培养基和无菌水瓶，点燃酒精灯，镊子、解剖刀、剪刀等接种工具灼烧灭菌，待冷却后使用。2）无菌操作接种 酒精灯火焰旁打开香石竹培养瓶，用镊子取出香石竹芽苗，置于无菌不锈钢碟子，用解剖刀将芽苗的每个小芽分开。用镊子将单个小芽插入生根培养基，每瓶接3个。盖上瓶盖，贴上标签，注明材料名称、接种日期和姓名。（3）培养将培养瓶表面用酒精擦拭消毒，置于培养室进行黑暗培