自由流电泳_FFE_技术_降低蛋白样品的复杂性.pdf

综述 技术 Review 自由流电泳(FFE)技术 ——降低蛋白样品的复杂性 杨晓燕 博奥生物有限公司 ( 北京 102206) Free-Flow Electrophovesis Focusing on Sample Preparootive Separation YANG Xiao-yan Capital Bio Corporation (Beijing 102206) 文章编号：1006-6586(2007)05-0008-03 中图分类号：R446 文献标识码：A BDTM FFE 自由流电泳系统是美国BD 公司研制的， 减少任何蛋白质组的复杂性的方法，常可用于1D 或2D 凝 基于无固相机制的自由流电泳系统。它为蛋白质组学研 胶电泳技术的补充。同时，连续流动的原理实际上可使样 究提供了高通量、高重现性、高灵敏度和操作简便的解 本被无限量的分离制备。这种具有很高的上样容量和有效 决方案。其高灵敏度和高准确性使得对目标蛋白的分离 分组分离能力的技术为富集低丰度蛋白, 去除生物样本如 比以往任何方法都更为有效，配备的96 孔收集装置和连 细胞裂解物或体液中的高丰度蛋白提供了方法学平台( 图1)。 续分离方案使得对低丰度目标蛋白的处理同样拥有高回 收率，而非变性电泳条件使得纯化后的功能蛋白更易保 2 FEE的原理 持活性。博奥生物有限公司是BDTM FFE 自由流电泳系 FFE 装置的主要功能 统在中国地区的独家代理。博奥生物可以为BDTM FFE 部分是由一个精确制造的两 自由流电泳系统的国内用户提供完善的技术支持和售后 块平板( 长度500mm ，宽 服务。下面将自由流电泳(FFE) 技术做一个简单的介绍。 度 100mm) 和隔膜构成的间 距很窄(0.4~0.5mm) 的分离 图2 分离腔 1 简介 腔。在分离腔的两边有两个电极可以在分离时提供高电 蛋白质组分析的进步在很大程度上依赖于降低蛋 压。样品连续注入分离腔，随着由一种或多种分离缓冲 白样品复杂性的新技术的发展，而后才是凝胶电泳、 液形成的薄层液流经整个腔体。电压方向与流动方向垂 液相色谱及质谱等系统分析技术的应用。自由流电泳 直。在分离缓冲液和样品流动的过程中，根据各组分的 (FFE) 作为最灵活的半制备到制备型的组分分离技术之 电荷不同而在电场的作用下发生偏移。这样，样品混合 一再次受到瞩目。这种独特而功能强大的方法可以分 物在经过分离腔后就分离为各种组分并被收集( 图2)。 离各种带电样品包括蛋白、肽、细胞器和全细胞。FFE 13 种分离缓冲液在正压下同时进入分离腔。缓冲 的广泛应用是通过不同的分离技术达到的：等电聚焦 液组成的变化和多个上样入口允许多种应用及pH 梯度 (IEF) ，区带电泳(ZE) ，和等速电泳(ITP) 。 的形成。样品可以通过位于分离腔一侧的4 个入口之 由于FFE 分组分离不需 一进入。通常这是由样品的特点和分离条件( 原始或 要介质，因此比传统的色谱和 变性) 决定的。在分离腔的另一侧，有96 个出口用于 凝胶基础上的分析具有更多优 将流出的液体分为96 个组分并收集到标准的微量板中。 势：更好的样品回收率，快速 在出口附近，有7 个额外的入口，用于输入所谓的与 分组分离和高通量。这些特点 主流方向相反的逆流介质( 图3) 。 使FFE 成为一种独特的能够 图1 FFE 自由流电泳系统 现代FFE 装置的另一个引人注目的特征是稳定性溶 收稿日期：2007-05-10 作者简介：杨晓燕，博奥生物有限公司产品应用专家 .  《中国医疗器械信息》2007年第13