杜泊绵羊超数排卵与胚胎移植试验教案.docVIP

杜泊绵羊超数排卵与胚胎移植试验 王金文 张果平 李焕玲 等 　摘　要　选纯种杜泊绵羊经产母羊22只为供体，通过实施同期发情和超排处理，20只可利用供体冲出胚胎153枚，其中可用胚胎104枚，平均每只供体采得可用胚胎5.20枚。选小尾寒羊经产母羊90只为受体，经同期发情处理，对有黄体发育的母羊72只实施胚胎移植手术。结果表明，移植单胚40只受体的受胎率47.50%，移植双胚32只受体的受胎率62.50%，平均受胎率54.17%。共产羔40只，每2.60枚胚胎产1只羔羊，每只供体羊冲胚1次繁殖2只羔羊。　　关键词　杜泊绵羊超数排卵胚胎移植 　　杜泊绵羊（DorperSheep）原产于南非，黑头白身躯，体躯成桶形，背腰宽平，后躯丰满，肌肉特别发达，具有典型的肉用体形。杜泊绵羊具有很强的适应性和抗病力，而且特别耐粗饲，对低品质牧草、秸杆等有较高的利用率。杜泊绵羊生长发育快，产肉力高，成年公羊体重100～120kg，母羊90～100kg。4月龄羔羊体重可达36～40kg，平均日增重300g以上，胴体重16～20kg。我所于2002年从国外引进杜泊羊并与小尾寒羊母羊开展杂交，杂一代公、母羊5月龄平均体重48.9kg，平均日增重306g；屠宰率50.6%，净肉率76.2%，料肉比4.25：1。杜泊绵羊被誉为“钻石级品牌”和“二十一世纪最具竞争力的肉用绵羊”。但是杜泊羊繁殖力相对较低，平均产羔率为150%左右，基本上是两年才产3只羔羊。自然繁殖很难达到快速扩大种群的目的，造成杜泊羊种羊数量少，价格偏高，无法在生产中推广，影响了良种产业化进程和经济效益的提高。通过胚胎移植技术，对杜泊羊供体进行超数排卵处理，并借小尾寒羊之腹怀胎，能够提高种羊的利用率，快速扩大杜泊绵羊种羊的数量。在开展多批次试验的基础上，本课题组通过对杜泊羊进行超排处理和移植试验，取得了较好的效果。　　1　材料　　1.1　供体羊　选2～3岁纯种杜泊绵羊经产母羊，繁殖机能正常。　　1.2　受体羊　选小尾寒羊经产母羊，年龄2～4岁，体重50kg以上，体格健壮，无传染性和生殖系统疾病，中等以上膘情。　　1.3　试情公羊　选健康无病，体重在75kg以上，性欲较好的非良种公羊为试情羊。　　1.4　种公羊　选体形外貌达到该品种标准，遗传性能稳定，性欲好的健康成年公羊。　　1.5　药品　PMSG（宁波激素厂）、氯前列烯醇（上海计划生育研究所）、阴道海绵栓（新西兰）、胚胎保存液（新西兰）、O-FSH超排药（新西兰）、冲胚液（新西兰）等。　　1.6　器械　外科手术器械，手术保定架，体视显微镜、冲卵管、检卵针、移植管等。　　2　方法　　2.1　供体羊超排处理　2004年11月28～29日对供体绵进行同期发情处理，在放置阴道海棉栓的第12天开始超排，使用o-FSH总剂量10ml，采用剂量逐日递减处理4天，每天上下午肌肉注射各一次。间隔12小时，在超排处理的第4天，即埋栓的第15天取栓，同时用加双抗（80万单位青霉素+100万单位连霉素）的生理盐水冲洗阴道。　　2.2　供体羊试情、配种　供体羊在取栓的第2天进行试情，发情的羊当天配种2次，第二天继续配种1～2次。　　2.3　冲卵　供体羊发情后6～7.5天采卵，采用子宫角方法。将子宫暴露于创口表面后，用套有胶管的肠钳夹在子宫角分叉处，注射器吸入预热的冲卵液20～30ml（一侧用液50～60ml），钝形冲卵针头从子宫角尖端插入，确认针头在管腔内，进退通畅时，将硅胶管连接于注射器上，推注冲卵液，当子宫角膨胀时，将回收卵针头从肠钳夹基部的上方迅速扎入，冲卵液经硅胶管收集于杯内，最后用两手拇指和食指将子宫角捋一遍。另一侧子宫角用同样方法冲洗。进针时避免损伤血管，推注冲卵液时用力和速度应适中。　　2.4　检卵　用玻璃棒清除卵外围的粘液，杂质。将胚胎吸至第一个培养皿内，吸管先吸入少许PBS再吸入卵，在培养皿的不同位置冲洗卵3～5次。依次在第二个培养皿内重复冲洗，然后把全部卵移至另一个培养皿。每换一个培养皿时应换新的玻璃吸管，一个供体的卵放在同一个皿内，操作室温度保持在20℃～25℃。　　2.5　胚胎质量鉴定　在20～40倍体视显微镜下根据受精卵的形态、色泽、分裂球的大小、均匀度、细胞的密度、与透明带的间隙以及变性情况等，将胚胎分为A、B、C三个等级。发情后第7天回收的受精卵在正常发育时应处于致密桑椹胚至囊胚阶段。凡在16细胞以下的受精卵及变性细胞超过一半的胚胎均属等外级，凡卵子的卵黄未形成分裂球及细胞团的，均列为未受精卵。　　2.6　受体羊同期发情　受体绵羊与供体羊同时埋植阴道海绵栓，并在埋栓的第15天提前12小时取栓，取栓同时肌肉注射PMSG400IU/只羊。第二天将试情公羊系上试情布放入受体羊群中，并记录取栓后2日内母羊发情情况。