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三、培养基的酸碱度 1、精确调试：用pH 测定计直接测定pH值，适用于单细胞和原生质体培养。 2、粗放调试：pH值试纸比色测定，方法简单、适用于器官和组织培养。 ●培养基pH 值用1 mol/L HCl或 KOH 进行调节。 ●调节的依据: 1)按照植物长期生活所适应的酸碱度来调节：如长江以南地区偏酸（红壤），北方地区偏中性或微碱性。多数植物适应的pH 值范围是5.8～6.0，有些适应范围则宽些。 * 果树：苹果5.8～6.0 葡萄5.7～6.0 桃6.0～7.0 荔枝5.8 2)依据培养基硬度： 培养基PH升高,其硬度增加;PH降低,硬度下降； 3) 依据培养基中某些物质的稳定性： 如FeCl2 pH＞6.2 失效 柠檬酸铁 pH＞6.0 失效 EDTA-Fe pH＝7.0 未失效(螯合铁,能忍耐高pH,) 赤霉素: pH＝3～4时,最稳定, pH＝1或 pH＝ 7.5时分解失活。 * §2-4 影响细胞全能性表达的因素 一、环境因素 (一) 湿度条件 1、微环境中（试管、三角瓶）相对湿度常常达到100%。 2、周围环境的相对湿度低于60%时，培养基容易干涸而会改变培养基的渗透压。 3、周围环境湿度过高时，培养室潮湿，具备各种细菌和霉菌的滋生条件，造成培养基和培养材料的污染。 4、周围环境较适宜的相对湿度为70%～80%。 * (二) 温度条件 1、范围:10～35℃； ◆最适: 28℃左右。 2、确定根据： ①植物种类的起源和生态型 （喜温还是喜凉）；②昼夜温差 。 * * (三) 光照条件 1、光周期的调节 三种基本方式：全暗、周期照光、散射性照光。 常用光量范围:1000～4000 Lx (勒克斯)，离体培养中通常难以达到4000 Lx,一般光量在2000～3000 Lx 。 100Lx≈1.9μmol·m-2·s-1（量子通量密度） 2、培养光照的确定： 依培养发育阶段：愈伤组织阶段弱，以后逐渐加强。 * * 3、光质： 一般用白炽荧光灯（日光灯），其光谱成分主要是蓝 紫光，波长为419 ～467nm。 新型冷光源：LED光源，具有节能，光质纯，可调节性 强等特点。 芽分化：篮紫光有效（450 ～ 540nm），红光无效。 根分化：红光有效（ 600 ～ 680nm ），蓝光无效。 * ★不同光质对培养物的分化有重要影响： 基本方式：红光与远红光；蓝紫光与红光。 可能的效应： 红光促进植物体内细胞分裂素的形成,或者抑制生长 素的形成。 远红光可能提高生长素水平。 总之,不同光质可能影响和改变植物体内内源激素水平。 * 二、植物遗传特性与生理状态 (一)遗传性与器官发生 1、不同基因型器官发生能力差异很大； 2、差异产生的基本原因： ①遗传稳定性：杂种分化能力大于纯种； ②基因型不同，生理类型不同：体内内源激素种类、 含量（水平）不同，形态发生能力不同。 * (二)供体植物生理状态与器官发生 因植物种类不同而异： ●营养状态：干旱、瘠薄地﹥湿润、肥沃地； ●生理年龄：早期、幼龄﹥中后期、老龄； ●培养保存时间：随继代培养时间延长，增殖和分化能力下降。 * 复习思考题 1.植物细胞全能性的概念？ 2.何谓细胞脱分化和再分化？ 3.分化期细胞内有哪些生化变化？ 4.机械隔离和生理隔离在细胞脱分化中的意义？ 5.植物激素在细胞分化中的作用? 6.何谓“胚状体”？其特征是什么？ 7.调节培养基渗透压有何意义？渗透调节物质主要有哪些？ 8.影响植物细胞脱分化和再分化的环境条件有哪些？ 9.供体遗传性和生理状态对植物细胞脱分化和再分化有何影响？ * * Plasmodesmata:胞间连丝；rough endoplasmic reticulum:粗糙内质网；smooth－－光滑内质网；peroxisome:过氧化物酶体，微体； * 由于所用细胞来源不同，细胞工程又可分为植物细胞工程、动物细胞工程、微生物细胞工程等。 * 1、细胞培养(Cell Culture)：指用能保持较好分散性的植物细胞或很 小的细胞团(6～7个细胞)为材料进行离体培养。如:生殖细胞(小孢 子)、叶肉细胞、根尖细胞、髓组织细胞等。 原生质体培养(Protoplast Culture)：指借助某些方法,除去植物细 胞的胞壁,培养裸露的原生质体,使其在特定的培养基上,重新形成细 胞壁并继续分裂、分化形成植株的方法。 2、 胚胎培养(Embryo c