PCR仪温度的准确性-ThermoFisherScientific.PDFVIP

应用说明4 PCR仪 PCR仪温度的准确性：几种模式的比较 简介 模式或梯度模式下，加热模块的不同部位设置为不同 PCR仪温度的准确性可能是决定PCR反应成败的关键 的温度。我们比较了目前市售的几款PCR仪，并将其 因素。在退火温度优化过程中，温度准确性尤为重 与制造商公布的参数进行比较。 要，该过程需要PCR仪加热模块具有准确性和一致 性。本研究采用精确的温度确认设备进行测量，比较 材料与方法 了PCR仪加热模块的准确性。在恒温模式下测量温度 本研究中测试的仪器如表1所示。采用相同的设备和 准确性，整个加热模块均为相同的温度；在VeriFlex™ 方法，具体如下文所述。 表1. 本研究中测试的仪器。 制造商 型号名称 货号 Bio-Rad C1000 Touch PCR仪(96孔快速反应模块) 185-1196 Bio-Rad BioRad T100 PCR仪 186-1096 Bioer GeneMax PCR仪 BYQ6067 Eppendorf Mastercycler Nexus Gradient 6331 000.017 Eppendorf Mastercycler Nexus GX2 6336 000.015 SensoQuest Labcycler Gradient 011-101 Takara Dice Touch TP350 Thermo Fisher Scientific ProFlex 96孔PCR系统 4484075 Thermo Fisher Scientific SimpliAmp PCR仪 A24811 恒温模式下测量加热模块的准确性 使用VeriFlex 96孔温度确认试剂盒(货号：4377669)及3种温度传感器测量加热模块的准确性。校准标准可追溯 至美国国家标准与技术研究院(NIST) 。每个传感器测量8个位置的温度，共提供加热模块不同点的24个温度测 量值。温度传感器分布示意图如图1所示。 孔A3 、A7和A 11的 位置5温度测试点 加热盖温度测试点 带状电缆 图1. 采用多传感器模块测量加热模块准确性。 取上述24个数据点的平均值，用仪器设置点数值减去平均值，确定加热模块温度的准确性。在仪器维持温度 ° 180秒后测量准确性。重复上述步骤3次，测量下列各温度设置点：45 、55 、72 、85和95 C。然后将准确性数 据与制造商网站上公布的参数进行比较。 利用VeriFlex加热模块或梯度加热模块测量温度准确性 利用Ve riFlex 加热模块或梯度加热模块技术改变温度，测试各仪器的准确性。Pro Flex 96孔PC R系统和 SimpliA mp