PK15细胞凋亡过程中角蛋白中间纤维的变化CURRENTZOOLOGY.PDFVIP

动物学报 　48 ( 1) :58～63 , 2002 A cta Zoologica S inica 　　　　　 　 PK15 细胞凋亡过程中角蛋白中间纤维的变化 陈丹英　高云飞　李丽霞　翟中和 (北京大学生命科学学院 , 北京 100871) 摘 　要 　用放线菌素 D 诱导上皮型猪肾细胞 PK15 ( Porcrne Kidney15) 发生凋亡。细胞在凋亡诱导过程中经历 了从铺展、皱缩变圆至脱落的形态变化。凝胶电泳证明被诱导细胞的 DNA 发生降解 , 形成明显的 DNA ladder 。 免疫荧光显示凋亡过程中细胞角蛋白网状结构发生改变 ; 应用选择性抽提结合整装电镜技术 , 观察到凋亡细胞 中仍有中间纤维网络存在 , 这一现象前人未曾报道。免疫印迹反应进一步证明 , 凋亡细胞中部分 Ⅱ型角蛋白发 生降解 , 而 Ⅰ型角蛋白则无降解现象。 关键词 　猪 　猪肾细胞 　PK15 　角蛋白 　中间纤维 　放线菌素 D 　凋亡 　　中间纤维 (intermediate filament , IF) 是细胞 诱导的凋亡细胞中被降解并使角蛋白纤维重组为颗 骨架的主要类型之一。已有大量的实验证据表明中 粒状结构。目前这一领域的研究论文相对较少且集 间纤维与细胞分化、信号转导、基因调控等生命活 中于生化指标的测定。本研究用放线菌素 D 诱导 动相关 ( Traub et al . , 1994) 。但 IF 确切的生物功 上皮型猪肾细胞 P K15 ( Porcine Kidney15) 发生 能至今仍不十分清楚。角蛋白是中间纤维家族的成 凋亡。相差显微镜观察发现细胞在诱导过程中经历 员之一 , 主要在上皮型细胞中表达 , 构成上皮细胞 了从铺展、皱缩变圆至脱落的形态变化。DAPI 荧 ( ) ( 的中间纤维网络 , 它包括 Ⅰ型 碱性 和 Ⅱ型 酸 光染色及 DNA 凝胶电泳证明诱导细胞具有明显的 ) 性 共 20 种蛋白 , 在每种上皮细胞中均有 Ⅰ型和 凋亡特征。免疫荧光结果显示 , 凋亡过程中细胞角 Ⅱ型角蛋白成对表达, 对维持上皮细胞的形态和胞 蛋白网状结构发生改变 ; 应用选择性抽提结合整装 间连接起主要作用 ( Fuchs et al . , 1994) 。现已证 电镜技术, 观察到凋亡细胞中仍有中间纤维网络存 ( ) 在。免疫印迹反应结果进一步证明 , 凋亡细胞中部 明多种皮肤病 包括皮肤癌 源自角蛋白基因的点 突变 ( Fuchs et al . , 1992) 。 分 Ⅱ型角蛋白发生降解 , 而 Ⅰ型角蛋白则无降解现 细胞凋亡 (apoptosis) 是一种重要的细胞生命 象。 活动现象。在凋亡过程中细胞的形态结构发生剧烈 1 　材料和方法 的变化 , 包括细胞膜皱缩 , 胞间连接减少 , 染色体 凝集 , 细胞核崩解并形成凋亡小体等 ( Wyllie et 11 　材料来源、凋亡诱导及倒置相差显微镜观察 al . , 1980) 。作为细胞的支架结构, 中间纤维在凋 猪肾细胞 P K15 由北京大学生命科学学院丁明 亡过程中发生怎样的变化 , 发挥什么作用 ? 这一问 孝教授惠赠 , 用含 10 %小牛血清的 DMEM 培养基 题的解答无疑有助于 IF 功能的研究。Rao 等 (p H 7 2 , Gibico