兔的碱性磷酸酶(ALP)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书.PDFVIP

Uscn Life Science Inc. Wuhan 网址: 电话: +86 27 传真: +86 27 E-mail: uscnk@ 兔的碱性磷酸酶(ALP)酶联免疫吸附测定试剂盒使用 说明书 产品编号：E1472Rb 规格：96T 本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断! 预期应用 本酶联免疫吸附测定试剂盒运用双抗体夹心 ELISA 法定量测定兔细胞裂解液中 ALP 含 量。 本试剂盒已提供的试剂 试剂名称 数量 试剂名称 数量 96孔板(预包被) 1 96孔板覆膜 4 标准品 (冻干) 2 标准品稀释液 1 × 20ml 检测溶液A （绿色） 1 × 120μl 检测稀释液A(2 x) 1 × 6ml 检测溶液B （红色） 1 × 120μl 检测稀释液B(2 x) 1 × 6ml TMB底物 1 × 9ml 终止液 1 × 6ml 浓洗涤液(30 x) 1 × 20ml 使用说明书 1 本试剂盒未提供但需自备的设备及试剂 1、450±10nm 滤光片的酶标仪（建议仪器使用前提前预热） 2、单道和多道微量加液器及吸头 3、稀释样品的 EP 管 4、蒸馏水或去离子水 5、吸水纸 6、盛放洗液的容器 试剂盒的储存及有效期 所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将标准品、检 测溶液 A 、检测溶液 B 以及96 孔板保存于-20 。开封后的酶标板要密封加干燥剂后保存 于-20 ，避免潮湿。有效期为 6 个月。 实验原理 将 ALP 抗体包被于 96 孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中依次加入标准品和标本， 其中的 ALP 与连接于固相载体上的抗体结合，洗板之后加入生物素化的 ALP 抗体，将未 结合的生物素化抗体洗净后，加入 HRP 标记的亲和素，再次彻底洗涤后加入底物(TMB) 显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜 色的深浅和样品中的 ALP 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ 值），计 算样品浓度。 标本的采集与保存 1、 细胞裂解液： 1）贴壁细胞需要先用胰酶消化，离心收集细胞（悬浮细胞可直接离心收集）； 2 ）将收集到的细胞用冷PBS 洗 3 次； 3 ）物理方法裂解细胞（可先超声破碎细胞，再反复冻融）： i 超声破碎：取适量 PBS 重悬细胞，用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震 荡破裂。 ii 反复冻融：将待破碎的细胞在-20 以下冰冻，室温融解，反复3 次，使细胞溶胀破碎。 4 ）将标本于2-8 1500xg 离心 10 分钟，收集上清备用。 注意： 1、 以上标本均需密封保存，4 保存应小于 1 周，-20 不应超过 1个月，-80 不应超 过2 个月。 2、 标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。 试剂准备 1、 使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25 )，试剂不能直接在 37 溶解。 2、 标准品 （冻干品）：每瓶 标准品用标准品稀释液稀释至 1mL，盖好后室温静置大约 10 分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解