(生物技术制药)4抗体工程制药（1概述）.ppt

（2）动物体内诱生法：可获得10mg/ml的抗体。 基本程序：接种前1-2周，小鼠腹腔注射0.5ml Pristane（降植烷）或用液体石蜡，然后注射1*106杂交瘤细胞，7-12d便有腹水生成，待生成腹水后再提取，离心去细胞沉淀，取上清液冻存。 优点：操作简便，比较经济，所得单克隆抗体量多且效价高，还可有效地保存杂交瘤细胞株和分离已污染杂菌的杂交瘤细胞株。 缺点：小鼠腹水中混有来自小鼠的多种杂蛋白，给纯化带来难度。 抗体 -a -b -c -d -a -b -c -d 抗原決定基 BALB/c a b b c d 传统抗体 (抗血清) 是所有抗体的混和 脾脏产生各种 B 細胞 免疫前要先 把抗原作 成乳剂 免疫 抗原 采血后可得传统抗血清 已建立之小鼠 骨髓癌细胞株 由脾脏收集 B 細胞 抗原通常有多个抗原決定基 免疫后 的脾脏 约在两月內 注射五到八次 Ag X -d 细胞融合 -a -b -c -d Ag X Ag X’ ELISA HAT PEG Cell fusion Hybridoma cells 融合瘤细胞 （Subcloning） (确定只有一种细胞) d’ d a b c d a b c d’ + + + + + + + - X -d -c -b -a + - -d NS-1 骨 髓 癌 细 胞 B cell 脾 细 胞 分株培养筛选 筛选 单抗 传统抗体 (抗血清) 试验专一性 对 抗 原 的 反 应 无 法 分 辨 完 全 不 同 d 旧有抗原 d’ 新的抗原 单克隆抗体用于免疫治疗存在的问题？ 单克隆抗体的特异性 由于肿瘤特异性抗原较少，缺乏对肿瘤有严格特异性的单抗，对正常组织有交叉反应 异种抗体反应 鼠源性单抗用于人体，产生人抗鼠抗体（HAMA），导致异源性超敏反应 至2003年再没有新的鼠源抗体药物进入临床研究 瓶颈：大规模动物细胞培养工艺，而此类工艺属于欧美严禁出口的技术，长期以来对我国实行封锁。 成都基地 （1）概念 抗原决定族 （Epitope, Antigenic determinant） ● 一个抗原分子上可能有数个抗原决定基 ● 每个 抗原决定族 至少诱生一种专一性抗体 ● 蛋白质性质 抗原决定基 含有六个以上氨基酸 第二节、单克隆抗体及其制备 多价抗原 单克隆 （致敏的B细胞） 单克隆抗体 单克隆抗体 基本原理 细胞工程抗体----杂交瘤----单克隆抗体 （2）多克隆抗体 (Polyclonal antibody) （2－1）概念 给动物接种抗原所获得的免疫血清或抗血清是多种抗体的混合物, 它是由多种抗原决定簇刺激多株B细胞增殖分化所产生的, 称为多克隆抗体. （2－2 ）实验室制备多克隆抗体 研究、诊断用 所用动物：1 Balb/c小鼠，6－8周龄；雄性 2 大鼠 3 兔子生后约12周。 抗原：1 纯化的抗原（线性抗原或构型抗原） 2 非纯化抗原 技术关键：抗原制备 应用：免疫学检测 抗血清 抗 原 免 疫 所有抗体混合 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 B 細胞 （2－3）制备多克隆抗体药物 －紧急被动免疫和及紧急预防 1 2 3 4 马血清 抗原 （破伤风毒素） 破伤风抗毒素血清 一头成年马反复采血可获得10000 ml以上的抗血清 类毒素 毒素 马血清 抗毒素 超敏反应 抗体 抗原 马血清抗毒素的两重性： (1) 特异性抗体----中和毒素 (2) 异种抗原，可刺激机体产生抗马血清抗体 马血清具有立即提供保护的优势，但异种gamma-球蛋白只是短期有效，常常导致病理合并症（血清病）和过敏反应。 人源多克隆抗体－血液制品 人的gamma-球蛋白是最理想的(同源性免疫球蛋白) ，但具有传播肝炎和爱滋病的风险。 献血员免疫（白喉毒素、狂犬病疫苗等） 少量采血测效价 大量采血 制备抗体 是 （3）单克隆抗体(Monoclonal antibody, McAb) （3－1）概念: 通过B细胞杂交瘤技术, 获得特异性针对某一种抗原决定簇的细胞克隆，产生均一性的抗体. 特点:单一特异;可重复;大量供应 不需纯抗原;灵敏度高 骨髓瘤细胞 致敏的B淋巴细胞 杂交瘤 HAT: 次黄嘌呤(H),氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T) HGPRT：次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转化酶 (3-2)、抗原与动物免疫 抗原：颗粒性抗原和可溶性抗原 不需纯化; 化学合成或者提纯 微生物或细胞可直接作为抗原 免疫动物：BALB/c