[生物学]第三章蛋白质一级结构的测定.ppt

蛋白质一级结构测定的意义 ①是推测蛋白质高级结构的分子依据 ②是理解蛋白质功能的分子基础 ③是阐明遗传疾病发生机理的分子手段 ④是研究生物进化的分子佐证 二十种常见蛋白质氨基酸结构的分类 非极性R基团氨基酸 不带电荷极性R基团氨基酸 带电荷R基团氨基酸 中性脂肪族氨基酸 酸性氨基酸及酰胺 碱性氨基酸 杂环氨基酸 芳香族氨基酸 (一) 蛋白质的水解： 1、酸水解 常用6mol/L的盐酸或4mol/L的硫酸在105-110℃条件下进行水解，反应时间24?72h，水解后除去盐酸。其中盐酸水解是目前水解蛋白质或多肽最广泛的一种方法。 此法的优点是不容易引起水解产物的消旋化，得到的是L-氨基酸。缺点是Trp被沸酸完全破坏；含有羟基的氨基酸如Ser、Thr、Tyr有一小部分被分解；Asn、Gln侧链的酰胺基被水解成了羧基。 甲基磺酸具有许多优点，目前，常用它代替盐酸来水解。 2、碱水解 一般用5mol/L氢氧化钠煮沸20h左右。 由于水解过程中许多氨基酸都受到不同程度的破坏，产率不高。 部分的水解产物发生消旋化，其产物是D-型和L-型氨基酸的混合物。 该法的优点是色氨酸(Trp)在水解中不受破坏。 3、酶水解 目前用于蛋白质肽链断裂的蛋白水解酶（proteolytic enzyme）或称蛋白酶（proteinase）已有十多种。 应用酶水解多肽不会破坏氨基酸，也不会发生消旋化。受酸水解