[理学]7基因芯片技术.ppt

DNA芯片 蛋白质芯片 细胞芯片 组织芯片 多糖芯片 神经元芯片 等等 生物芯片包括： DNA芯片 蛋白质芯片 其它芯片 DNA芯片技术是指在固相支持物上原位合成（in situ synthesis）寡核苷酸探针，或者直接将大量的DNA探针以显微打印的方式有序的固化于支持物表面，然后与标记的样品杂交，通过对杂交信号的检测分析即可得出样品的遗传信息（基因序列及表达的信息）。 高度集成化 大通量平行分析 大规模 高灵敏度 样品需要量小 操作过程（见下图） 使支持物氨基化 用光不稳定保护基（photo labile protecting group）将NH2基保护起来 选择适当的挡光板（mask）使需要聚合的部位透光，不需发生聚反应的部分不透光。这样，光通过挡光板照射到支持物上，受光的部分NH2解保护 合成所用单体分子一端按传统固相合成方法活化另一端则受光敏保护基团保护。这时，用单体分子去和支持物上解保护的氨基反应，偶联后的部位将仍旧带上保护基团。 类似地，进行以后其它反应直至得到目的寡聚体序列。 光引导原位合成技术原理图 仪 器 1．? 恒温摇床 2．? 培养用锥性瓶 3．? 超净工作台 4．? 离心机 5. 灭菌锅 思考题 生物芯片的定义、分类及制作方法？ 基因芯片技术与传统的Northern杂交技术有何异同？ 考试题型 一、名词解释（每小题2分，共10分） 二、判断题（每小题1分，共10分） 三、填空题（每空格0.5分，共20分） 四、选择题（在下列各小题的备选答案中，请把你认为正确答案的题号填入题干的括号内。少选、多选不给分。每题1分，共20分） 五、简答题（每小题6分，共30分） 六、问答题（10分） 总成绩=30%平时成绩+70%考试成绩 恒温空气摇床 超净工作台 离心设备 台式高速冷冻离心机 1 2 1、对照菌 2、GFP诱导表达菌 电泳仪 仪 器 电泳槽 SDS凝胶电泳系统 ?根据芯片固定的生物分子类型可以将生物芯片划分为基因芯片、蛋白质芯片及芯片实验室。 ????① 基因芯片或 DNA 芯片 ????② 蛋白质芯片（Protein Chip） ????③ 芯片实验室（Lab-on-Chip）  三．按芯片固定的生物分子类型 生物芯片因功能和用途不同可分为测序芯片、表达谱芯片和基因差异表达分析芯片等。 ????① 测序芯片 ????② 表达谱芯片 ????③ 基因差异表达分析芯片 四．按芯片使用功能分类 第三节　基因芯片的制作 基因芯片研制的总体蓝图 研制方向的确定 基因组序列分析与待检基因探针序列的确定 检测样品 的制备 探针阵列的准备 检测设备的研制 杂交检测与数据分析 一、DNA 样品的来源 　　根据基因芯片的检测目的不同,可以把样品制备方法分为 　　用于表达谱测量的mRNA样品制备 　　用于多态性(或突变)研究的基因样品的制备 ?生物芯片微阵列的制作技术按照制作方法可分为两大类，即原位合成和预合成后点样。 二．生物芯片的制作 ?预合成后点样 　　指制备芯片微阵列前，要固定的探针已经合成好，点滴系统需要做的就是把这些合成好的样品涂印或喷涂在基体上。 原位合成方法 　　由点滴系统将探针的组成部分逐步转移到基体上，同时实现探针合成和转移的目的。 该方法有两类： 　　光引导原位聚合技术与压电打印原位聚合技术。 ① 接触点样法 ② 喷墨法 ③ 光刻 DNA 合成法 　　目前已经知道的基因芯片制作法有，接触点样法、喷墨法和原位合成法等。 光引导原位聚合技术 Light directed oligonucleotide synthesis. A solid support is derivatized with a covalent linker molecule terminated with a photolabile protecting group. Light is directed through a mask to deprotect and activate selected sites, and protected nucleotides couple to the activated sites. The process is repeated, activating different sets of sites and coupling different bases allowing arbitrary DNA probes to be constructed at each site. 原位合成(In Situ Synthesis) 　　光引导原位聚合技术的简要过程为：首先