栽培灵芝胞外酶活性及多糖变化规律的初步研究-中国中药杂志.PDFVIP

第 34 卷第 4 期 Vol.34 ，Issue 4 2009 年 2 月 February ，2009 ·研究报告· 栽培灵芝胞外酶活性及多糖变化规律的初步研究 刘健鹏，兰 进* （中国医学科学院协和医科大学 药用植物研究所，北京 100193 ） 7灵芝是我国传统的名贵真菌类药材，现代科学 2 方法 研究表明，其具有广泛的药理作用和多方面的医疗 2.1 样品的采集和处理方法 保健价值，基本无毒副作用。引起了广大研究者和 2.1.1 取样时间 采用随机混合取样的方法，分别 具有养生保健意识的人士的极大关注[1] 。当前灵芝的 在菌丝满袋时、现蕾期、菌盖初现时、开伞期、孢 研究多侧重于化学成分及其药理活性[2-5]，对其生理 子弹射前、孢子弹射后取子实体和菌质。 生化的研究不少，但对其胞外酶的研究甚少。胞外 2.1.2 样品制备 采集菌棒，用刀在菌棒前端切取 酶是灵芝在其生长发育过程中为获得自身生长所需 厚约 1 cm 的菌质，切碎混匀后取5 g 加入预先配制 的营养合成和分泌，参与培养料中养分的分解和吸 好的缓冲液 20 mL，在4 ℃冰箱中提取 12 h 后于 4 收的高效工具，其变化规律和灵芝的产量和质量密 ℃ 1 万 r·min-1 离心 15 min，收集上清液作为粗酶液。 切相关。 2.2 酶活性的测定 本研究对代料栽培灵芝生长发育过程中几种胞 参照文献[6]，采用 ABTS 法测定漆酶活力； 外酶的活性及 2 种不同栽培方式的灵芝多糖的含量 Mn （Ⅱ）氧化法测定锰过氧化物酶活力；亚甲基蓝 进行了测定，寻找其在灵芝生长发育过程中的变化 （ methylene blue ，MB ）法测定木素过氧化物酶活 规律，探索它们和灵芝的产量和质量的关系，为进 力。漆酶活力单位定义为反应体系中每分钟催化 1 一步研究灵芝的营养和发育生理提供了依据。 μmol·L-1 ABTS 氧化所需要的酶量。锰过氧化物酶 1 材料 和木素过氧化物酶活力单位都用每分钟使吸光度 1.1 供试菌株 值增加 0.1 的酶量来表示。 灵芝 S3 号菌株，由中国医学科学院、中国协 纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶和淀粉酶的活力 和医科大药用植物研究所生物技术实验室提供，该 测定采用 [7] 3，5-二硝基水杨酸（DNS ）比色法 ，其 菌株 1999 年由神舟号宇宙飞船进行了搭载，大量 酶活力单位定义为每分钟催化生成 1 μmol·L-1 产 研究表明其具有优质高产的特性，遗传稳定。 物所需要的酶量。 1.2 仪器及试剂 2.3 灵芝多糖的测定 755B 型紫外-可见分光光度计（上海精密科学 2.3.1 样品的采集和处理方法 采集段木和代料 2 仪器有限公司制造）；CS101-2 AB 型电热鼓风干燥 种栽培方式各生长阶段的子实体和孢子，除去泥