细胞转染套装.PDFVIP

293 细胞转染套装 货号：SF293T1 一、产品介绍 用于293 系列细胞的悬浮培养和瞬时转染。 SMM 293 T IS培养基是一种化学成分确定，无血清的液体培养基。此培养基专门为支持 悬浮类型培养条件下，293EBNA及相关的细胞（如293-F，293H 等）的长期生长和瞬时转染 而开发的。此培养基不含L-谷氨酰胺，使用时需加入4mM 的L-谷氨酰胺。转染时不需更换培 养基，操作方便快捷。 Sinofection-293转染试剂是在Sinofection转染试剂基础上，经过改良，专门用于293EBNA 及相关的细胞（如293-F，293H 等）悬浮条件下的瞬时转染。毒性更低，转染效率更高，蛋 白和抗体的产量也更高。 SMS 293-SUPI是一种无蛋白，无血清的液体加料液。 二、产品组分 组分 含量 应用 SMM 293 TIS培养基 1 L 专用于HEK 293细胞的哺乳动物细胞培养基 Sinofection-293转染试剂 2 mL 专用于HEK 293悬浮细胞的转染 SMS 293-SUPI加料液 100 mL SMM 293 TIS培养基加料液 三、储存条件 SMM 293 T IS 培养基2-8℃避光储存12 个月； Sinofection-293转染试剂建议在-20℃长期存放； SMS 293-SUPI 2-8℃避光储存12个月。 四、产品特点  高的蛋白或抗体产量  操作简易，节省时间  易于实现放大规模瞬时转染 五、操作流程 以100 mL培养瓶（溶液体积占瓶体积的1/5）操作体系举例如下： 用于瞬时转染的细胞要在复苏后至少3代后，且处于对数生长期，活率在90% 以上。 1. 转染当天，取样计数细胞密度和活率。用37 ℃水浴锅里预热好的新鲜SMM 293 TIS培养 6 基稀释处理细胞，密度到1×10 cells/mL，每瓶细胞液体积为20 mL，然后旋紧瓶口放入 摇床继续培养，2~4小时后进行转染。 2. 转染液的配制： （1）用150 mM 的NaCl 稀释10µg DNA，混匀后放置5 min ； （2 ）往DNA稀释液中加入50 μL的Sinofection，最终转染液的总体积为1 mL，混匀后放 置10 min 。 3. 将转染液逐滴加入到细胞培养液中，摇匀后旋紧瓶口放回摇床，36.5℃ ，5%CO2 ，110-175 rpm继续培养。 4. 转染第二天，旋松瓶口，关闭摇床的CO 控制。 2 5. 转染后48~72h后可检测基因表达。如用于重组蛋白、抗体生产，转染20-24h后按1-5%的 量加入，可每天加入也可隔天加入，详见SMS 293-SUPI加料液说明书。 建议:因为每个实验室的操作略有不同，如果采用上述的实验流程得到的效果不佳，则可进 行Sinofection （20μl，30μl，40μl，50μl，60μl）与10μgDNA 的比例实验，找到最佳转染条 件。 图1 转染过程 附：细胞培养流程 细胞复苏 1. 迅速取出冻存的细胞，在37 ℃水浴锅下使其溶解，整个过程最好控制在1 min 以内； 2. 轻轻的混匀细胞并全部移到50 mL的离心管中，逐滴加入5~8 mL在37 ℃水浴锅里预热好 的新鲜SMM 293 TIS培养基； 6 3. 取样计数细胞密度和活率，稀释处理，确保细胞密度在0.3-0.4 ×10 cells/ml ； 4. 放入37 ℃，5%CO2 ， 110-175 rpm恒温摇床中培养。 细胞扩增 6 1. 培养2-4天后，取样计数细胞的密度和活率。当细胞密度大于1×10 cells/ml，细胞活率大 于90%，则进行稀释传代处理，用37 ℃水浴锅里预热好的新鲜SMM 293 TI