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第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 用于测定无机离子的有机试剂 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 第十一章 荧光分析法 小结 第一节 荧光分析法的基本原理 三、影响荧光强度的外部因素 1. 温度的影响 荧光强度对温度变化敏感，温度增加，外转换去活的几率增加。 2. 溶剂的影响 除一般溶剂效应外，溶剂的极性、黏度、氢键、配位键的形成都将使化合物的荧光发生变化； 3. 溶液pH 对酸碱化合物，溶液pH的影响较大，需要严格控制； 第一节 荧光分析法的基本原理 三、影响荧光强度的外部因素 4. 荧光熄灭剂 荧光熄灭又称荧光淬灭，是指荧光物质分子与溶剂分子或其他溶质分子相互作用引起荧光强度降低的现象。引起荧光熄灭的物质称为荧光熄灭剂。 如果一个荧光物质在加入某种熄灭剂后，荧光强度的减弱和荧光熄灭剂的浓度呈线性关系，则可利用这一性质测定荧光熄灭剂的含量，该方法称为荧光熄灭法。 第一节 荧光分析法的基本原理 三、影响荧光强度的外部因素 5. 散色光 当一束平行单色光照射在液体样品上时，大部分光线透过溶液，小部分由于光子和物质分子相碰撞，使光子的运动方向发生改变而向不同角度散射，该光称为散射光 瑞利散射 光子与物质发生弹性碰撞，不发生能量 交换，仅是光子运动方向发生变化。 拉曼散射 光子与物质发生非弹性碰撞，发生能量交 换，光子运动方向改变。其波长与荧光波 长接近，对荧光测定干扰更大。 消除方法：选择适当的激发波长可消除拉曼光的干扰 图 11-6 第一节 荧光分析法的基本原理 三、影响荧光强度的外部因素 5. 散色光 a：硫酸奎宁在不同激发波长下的荧光 b：0.1mol/L硫酸溶液在不同波长下的拉曼散射光 选择320nm做激发波长 第二节 荧光定量分析法 第一节 荧光分析法的基本原理 第三节 荧光分光光度计和其他荧光分析技术 第二节 荧光定量分析方法 第二节 荧光定量分析方法 入射光 I0 透射光 I 荧光 F 由于荧光物质是在吸收光能而被激发之后才发射荧光，So,溶液的荧光强度与该溶液中荧光物质吸收的程度以及荧光效率有关 第二节 荧光定量分析方法 第二节 荧光定量分析方法 一、荧光强度与物质浓度的关系 I0 It F 定量依据 荧光强度正比于被荧光物质吸收的光强度，F?（I0-It） F=K’(I0-It） K’：常数，取决于荧光效率 （11-2） 根据朗伯-比尔定律：It=I010-Ecl （11-3） 将（11-3）代入（11-2）：F=KI0（1-10-Ecl）=KI0（1-e-2.3Ecl） 若c很小，当Ecl?0.05时: F = 2.3K’I0Ecl = Kc （11-6） So,在低浓度时，溶液的荧光强度与溶液中荧光物质的浓度成线性关系。 F=Kc 第二节 荧光定量分析方法 第二节 荧光定量分析方法 一、荧光强度与物质浓度的关系 I0 It F F = 2.3K’I0Ecl = Kc (荧光） A = lg(I0/It) = kc （朗伯比尔定律） 为什么荧光分析法的灵敏度比紫外-可见分光光度法的灵敏度高？ FL ：测定的是很弱的背景上的荧光强度(I0)，其