浅论人乙型淀粉样蛋白(hAbeta)的基因克隆、原核高效表达及分离纯化.pdfVIP

人乙型淀粉样蛋白（hAbeta ）的 基因克隆、原核高效表达及分离纯化 摘 要 多项研究表明，乙型淀粉样蛋白（amyloid beta protein, Abeta)在脑内的 大量产生并堆积是导致阿尔茨海默氏病(Alzheimer’s desease, AD)发生的首 要原因。在未来AD 的诊断和治疗领域中，Abeta可能会扮演更为重要的角 色。论文首先利用重叠PCR技术克隆出人的乙型淀粉样蛋白基因并成功构 建出原核表达质粒pGEX-Abeta ；转化大肠杆菌DH5α后，优化目的融合蛋 白GST-Abeta 的各项摇瓶发酵条件；最后采用亲和色谱直接纯化出目的融合 蛋白GST-Abeta 。结果如下： 1、原核表达质粒pGEX/Abeta 的构建 根据 Genbank 提供的人 Abeta 氨基酸序列，人工合成了两对 PCR 引物。 采用重叠 PCR 方法获得全长人 Abeta 基因片段后，利用 T-A 原理将扩增的 外源目的片段插入 TOPO-TA2.1 克隆载体，转化大肠杆菌 DH5α 并提取质 粒 DNA 。经PCR 、酶切、序列分析等多步鉴定，确认克隆的基因片段为人 Abeta 基因后亚克隆入表