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☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆ 花 卉 育 种 学 （遗传与组培） ☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆ 实习实训指导书 园林植物栽培与保护教研室 2005年9月 前言 花卉育种学在遗传学规律的指导下进行遗传改良的重要学科，它与植物细胞学、生理学、分子生物学等课程密切相关，是专业所设置的专业基础课。 育种学既是一门理论性很强的学科，也是一门实践性强的课程，要好这门课程，除了搞好课堂教学外，实训教学也十分重要，它是育种学中极其重要的组成部分。 本实习实训指导，根据最新课程计划0学时所设立的学时实习实训要求，共开设个实验，它们是：减数分裂、组织培养选择和树木杂交实验前三个实验为遗传学的内容，后个属育种学的范畴。通过减数分裂的实验，可使学生获得一些有关细胞遗传学的感性认识，使其加深对理论的理解；通过选择、杂交实验和组织培养的实习实训，使得学生掌握《育种》中的主要方法和操作技术。 本指导适用于园林专业的学生。 ? 学生在做每个实习实验时都必须详细、如实地做好原始记录，实验完毕后根据记录写成书面报告。实训报告应包括下列各项内容： 1、实训题目与实训日期。 2、实训目的：简要叙述本实训所要说明的问题。 3、操作步骤：详尽叙述本实验的操作过程，以便今后能重复该实验。 4、结果：详细记载所得的数据或现象，并根据要求加以整理。 5、结论与讨论：简明扼要地写出通过实习实验所得到的结论，如有可能，可与文献上的结果进行比较。 ? 目 录 实习实训一 切片制作法（石蜡切片法）减数分裂人工诱发多倍体植物实习实训一??切片制作法（石蜡切片法） ㈡用具 小标本缸，镊子，蜡杯，载玻片，毛笔，刀片，量筒，滴管，酒精灯，小木块，吸水纸，切片机，熔腊箱，展片台，真空泵，解剖针。 ㈢实验药品及配制 试剂 70%、85%、95%、100%的酒精,二甲苯,甘油蛋白,固定液,石蜡。 药品的配制 卡氏固定液配方 冰醋酸∶ 乙醇 =1∶3 配制甘油蛋白 取鸡蛋的蛋白加入等量的甘油搅拌混合，至均匀为止。加入1%的麝香草酚，以防止微生物的侵入和腐败。 三、实验步骤 ㈠取材固定 用刀片切取云杉幼叶，立即投入盛有卡氏固定液的小杯中。固定液的用量约为材料的10～15倍，固定时间4～12h。 ㈡洗涤 倒出固定液，加入70%酒精，隔数小时后再换一次。 ㈢脱水与透明 将材料从70%的酒精中取出，顺序放入85%乙醇（10min）→95%乙醇（10min）→100%乙醇（10min）→二甲苯1∶乙醇4（10min）→二甲苯2∶乙醇1（10min）→二甲苯4∶乙醇1（10min）→二甲苯→二甲苯（抽气3～5min）。 ㈣透蜡： 1、透蜡前，先作好准备工作，选取适当熔点的石蜡，融化，分装在A、B、C三个蜡杯内，置入熔蜡箱，（55～60℃）。另外，再准备一杯石蜡，供包埋用，也置于熔蜡箱内。 2、将以透明的材料从二甲苯中取出，放入蜡杯A（30min）→蜡杯B（30min）→蜡杯C，0.5h后即可包埋。 ㈤折纸盒。 ㈥包埋： 1、将热石蜡注入纸盒内，用镊子夹取组织块放入盒的中央位置。 2、将纸盒一半浸入冷水中，待表面石蜡凝成一层膜后，将纸盒迅速全部浸入冷水中，待石蜡全部凝结变硬即可取出。 ㈦修切蜡块：把包埋好的蜡块用刀片修切成长方形。 ㈧固定蜡块：取小木块，用蜡铲加上热石蜡，再融化蜡块底面，沾于小木块上，冷却后装在切片机上。 ㈨切片。 ㈩展片、贴片： 1、准备好展片台，保持温度比包埋石蜡的熔点低5～6℃。 2、取洁净的载玻片涂以甘油蛋白。 3、在涂有甘油蛋白的载玻片上滴二滴蒸馏水，用刀片将腊带切成适当长度的片段，以小镊子夹取腊带，使浮在玻片的水上。再将玻片放在展片台上，腊带受热自动展开。待完全展平后，用吸水纸吸去多余水分。 四、作业 ㈠绘制出所观察到切片组织的解剖图。 ㈡简述石蜡切片的方法步骤。 实习实训二 减数分裂 、实验目的 了解动、植物的生殖细胞的形成过程。 掌握制片方法。 、实验材料材料花蕾短角斑腿蝗（Catantopsbrachycerus）精巢 用具：镊子，解剖针，载玻片，盖玻片，大培养皿，立式染缸，酒精灯，量筒，吸水纸，显微镜。 药品：无水乙醇，冰醋酸，洋红（carmine），甘油，松香石蜡。 Carnoy固定液：无水乙醇3份，冰醋酸1份。 醋酸洋红：45％醋酸100毫升，加洋红1克，煮沸（沸腾时间不超过30s），冷却后过滤即成。也可以再加1～2％铁明矾水溶液5～10滴，色更暗红。 封蜡：用等量的松香（balsam）和52℃石蜡加热混合而成，所以又称松香石蜡。 ?、实验步骤 花的观察 1采集刚现蕾的花序置于固定液内固定后，换入70％的乙醇中。若需保存较久，可放在70％乙醇一份、甘油一份的