金银花提取液抑菌活性的研究_康旭1.docVIP

金银花提取液抑菌活性的研究 摘要 [目的]对金银花水提液和醇提液的抑菌活性进行研究。[方法]首先用滤纸片法测定了样品对几种受试菌的抑制活性,再采用 微量稀释法测定了敏感菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。[结果]金银花水提液对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌具 有抑制作用,对金黄色葡萄球菌的MIC为19.25%,MBC为38.50%;对枯草芽孢杆菌的MIC为38.50%。金银花醇提液对沙门氏菌、金 黄色葡萄球菌、巨大芽孢杆菌具有抑制作用,对沙门氏菌的MIC为9.80%,MBC为19.60%;对金黄色葡萄球菌MIC为19.60%,MBC为 39120%;对巨大芽孢杆菌的MIC为19.60%。[结论]金银花水提液和醇提液对部分受试菌具有明显的抑制作用。 关键词 金银花;水提液;醇提液;最小抑菌浓度;最小杀菌浓度 金银花是忍冬科多年生常绿缠绕灌木忍冬、山银花以及同属多种植物忍冬的干燥花蕾,外形呈棒状,淡黄色,气香,味淡,微苦。金银花具有解热、消炎、抑菌、抗病毒、利胆保肝、止血抗氧化、免疫调节等作用。在我国,金银花主要产于河南、山东、广西、湖南、广东、湖北、安徽、四川、浙江、陕西、江苏、江西、贵州等地[1]。近年来,随着各种抗菌素的广泛应用,细菌的抗药性问题变得越来越突出。据报道,几乎所有的细菌都有对某种抗生素的耐药株型。抗生素效价不断下降、所需剂量增大而引发的副作用也在不断增大[2]。在这种情况下,研究天然植物的抗菌活性,开发非抗生素类抗菌药品就显得极为重要。笔者以金银花为原料,研究其水提液和乙醇提取液对5种细菌的抑制作用,旨在为金银花的进一步开发利用提供依据。 1 材料与方法 1.1 材料 沙门氏菌、巨大芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌由湖北工业大学微生物实验室提供。MH琼脂培养基、MH肉汤培养基购于南京一基生化科技有限公司。 1.2 提取液的制备 1.2.1 水提液。称取200 g干燥的金银花,加入15倍水,浸泡2 h。煎煮3次,每次2 h,第2、3次均要挤干药渣,合并煎液和挤出液。用滤纸过滤,然后用旋转蒸发仪浓缩,收集得浓缩液[3]。1.2.2 醇提液。取水提过的金银花渣, 60e干燥,粉碎,过40目筛,用无水乙醇索氏提取器提取2次,每次2 h,至醇液变清为止,混合提取液,用旋转蒸发器浓缩。 1.3 测定项目与方法 1.3.1 抑菌活性。采用滤纸片扩散法[4-5],测试金银花水提液(A)、醇提液(B)对沙门氏菌、巨大芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的抑制活性,水提液以无菌水(C)为参比,醇提液以无水乙醇(D)为参比。A和B均用无菌滤膜过滤除菌。测试菌液稀释到2@108CFU/m,l吸取0.1ml涂布在MH琼脂板上,敞开盖子在无菌操作台干燥3~5min。分别在灭菌的9mm滤纸片上注入20Ll样品液,放置于培养基表面,平板在4e放置2 h,然后于37e培养箱中培养24 h。每皿A、B、C、D 4个样品,作为一组,每组3个平行。用游标卡尺测量抑菌圈直径,取平均值。 1.3.2 最小抑菌浓度和最小杀菌浓度。采用滤纸片扩散法测试所确定的敏感菌,再采用微量稀释法[5-7],分别测定最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)。在96孔板中先加入MH肉汤培养基160L,l再加入20Ll稀释到2@105CFU/ml测试菌液,最后按列加入倍比稀释的无菌样品A、B各20L,l混匀,最后一孔加入已灭菌的生理盐水作为空白对照。每个浓度做3个平行,使最终菌液浓度达2@104CFU/ml。A、B浓度梯度各为7个,于37e培养箱中培养24 h肉眼观察,孔中菌液澄清则判断为抑菌,菌液浑浊则判断为有菌生长。在澄清与浑浊的分界处取澄清液中所加的样品A、B浓度即为MIC。把澄清孔中培养液接种到MH琼脂培养基平板上,每个浓度3个平行,再放置到37e的培养箱中培养24 h,观察,以无菌生长的最小样品浓度为MBC。 2 结果与分析 2.1 抑菌作用 由表1可知,金银花水提液对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌有抑制作用,且对金黄色葡萄球菌抑制作用明显,对其他3种菌无抑制作用;金银花醇提液对沙门氏菌、巨大芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌有抑制作用,参比乙醇对照组,抑制作用的强弱顺序为沙门氏菌金黄色葡萄球菌巨大芽孢杆菌,对沙门氏菌抑制作用明显,而对枯草芽孢 杆菌和大肠杆菌无抑制作用。 表1 金银花提取液抑菌圈的平均直径 Table 1 Average diameter of inhibition zone of extracts fromLonicera japonicaThunbmm 菌株 BacteriaA B C D 沙门氏菌Salmonella9.0 30.4 9.0 19.9 巨大芽孢杆菌Bacillusmegaterium9.