年产300吨硫酸链霉素生产线课程设计精选.docx

前言硫酸链霉素的主要成分是链霉素。链霉素（Streptomycin）是瓦克斯曼〔Waksman S.A.)于1944年从灰色链霉菌（Streptomyces,griseus）培养液中分离出来的一种碱性抗生素。链霉素是一种相当强的有机碱，也是一种多糖类化合物。其分子结构是由链霉肌、链霉糖和N-甲基-L-葡萄糖胺三部分以苷键相联结而成的。链霉素碱稳定性特别差，工业产品主要是其硫酸盐形式，即硫酸链霉素(Streptomycin Sulfate)。链霉素是氨基糖甙碱性化合物，它与结核杆菌菌体核糖核酸蛋白体蛋白质结合，起到了干扰结核杆菌蛋白质合成的作用，从而杀灭或者抑制结核杆菌生长的作用。由于链霉素肌肉注射的疼痛反应比较小，适宜临床使用，只要应用对象选择得当，剂量又比较合适，大部分病人可以长期注射(一般2 个月左右)。所以，应用数十年来它仍是抗结核治疗中的主要用药。因此链霉素对结核杆菌有强大抗菌作用，其最低抑菌浓度(MIC)一般为0.5 mg/L。它对许多革兰氏阴性菌(G-)如大肠杆菌、肺炎杆菌、肠杆菌属、沙门菌属、布鲁菌属等也具抗菌作用。链霉素对革兰氏阳性菌(G+)抗菌活性较差。链霉素游离碱为白色粉末。大多数盐类也是白色粉末或结晶，无嗅，味微苦。链霉素在中性溶液中能以三价阳离子形式存在，所以可用离子交换法进行提取。其水溶液比较稳定，但其稳定性受PH值和温度的影响较大。其硫酸盐的水溶液在PH=4--7，室温下放置数星期，仍很稳定，如在冰箱中保存三个月内活性无变化。目前抗生素的生产主要是利用微生物发酵来进行，少数采用化学合成的方法，当然也有的采用化学法或生化法半合成。对于链霉素可由灰色链霉菌发酵生产。双氢链霉素可由湿链霉菌产生，但通常以半合成方法生产。一般认为链霉素是治疗结核杆菌感染的首选药物，除此以外，还用于治疗革兰氏阴性菌所引起的泌尿道感染、结核性脑膜炎，鼠疫，肠道感染，肺炎，败血症，百日咳等。链毒素的缺点是容易产生耐药性；长期使用对第八对脑神经有毒害除了医用外，也有报道将链霉素用于农牧业的。例我国新疆某生产建设兵团的农场自1985 年起应用链霉素治疗菜类瓜类和粮食等作物的病害，取得较好效果；链霉素还可用于猪肺炎，雏鸡白痢疾、以及鸡，鸭，鹅的巴氏杆菌感染等的治疗。国内有些厂家将生产的链霉素作为农用出口，效益较好。硫酸链霉素工业盐即链霉素工业产品（原料药），与链霉素相比，其生物活性没有变化，只是在分离纯化工艺中使用了稀硫酸作为离子交换色谱柱的洗脱液。因此使链霉素酸化，故而称为硫酸链霉素和链霉素相比，硫酸链霉素具有化学性质更为稳定，保存期更长的优势，因此工业上常以生产硫酸链霉素为主。1菌种的选育及制备1.1菌种的选育1.1.1 菌种活化取保存期一年内的灰色链霉菌菌株(Streptomyces griseus)冷冻甘油管一支。菌种由中国工业微生物菌种保藏中心提供，编号CICC11002。用平板划线法将菌种接种于培养基，进行活化，培养配方为：葡糖糖1%，蛋白胨0.2%，豌豆汁（13粒/100ml），氯化钠0.25%，琼脂2%碳酸钙0.02%，PH调至7.4；30℃培养8日。之后，进行观察：首先观察培养基内菌落菌落是否为为白色丰满的梅花形和馒头形，背面为淡棕色色素菌落；之后，取少量进行涂片，简单染色后观察细胞形态状况，排除形态异常菌落，于斜面固体培养基内传代作为种子使用, 传代培养基成分与活化培养基成分相同。　　　1.1.2孢子生产取上一步活化菌种斜面一支，进行种子子培养。产种子培养基成分为：酵母浸膏2%，七水合硫酸镁0.05%，磷酸氢二甲0.05%，葡萄糖1%，氯化钠0.5%，PH调至7.8。培养基灭菌后，于超净台内接种，接种孢子的浓度按2.5%接入100ml培养基，30℃、200rpm震荡培养48小时。1.1.3摇瓶发酵将种子按照6%浓度分别接种于5个三角瓶中的生产培养基中进行发酵实验。培养基成分为：黄豆饼粉5%,玉米淀粉4%，硫酸铵0.6%，磷酸氢二钾1%。30℃、200rpm震荡培养48小时，之后降温至28℃，继续震荡培养96小时。1.2HPLC法检测发酵产物含量分别从5个三角瓶中各取100μl发酵液，过0.45μm孔径膜除去杂质，4摄氏度保存备用。之后，称取0.05g标品，置于50ml容量瓶中，加0.1mol/L氢氧化钠10ml，60摄氏度水浴40min。之后，各加入1%硫酸铁铵0.5ml使之与发酵液中的产物络合，之后超纯水定容，过0.45μm膜除去杂质。色谱柱:选用SymmetryshieldTM RP18 C18柱(5 μm，3.9 mm× 150mm)色谱柱，流动相:乙腈-庚磺酸钠溶液(1.0g庚磺酸钠溶于500mL水，体积比20∶80)，流量:0.5mL/min，柱温:30C检测波长330 nm，进样体积:5.0μL，保留时间