实验1 大肠杆菌的培养和分离(答案).docVIP

选修一 实验1 大肠杆菌的培养和分离 一、知识要点： 1．微生物是指结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物，包括病毒、原核生物、原生生物和某些真菌。细菌是单细胞的原核生物，有细胞壁（肽聚糖）、细胞膜、细胞质，无成型的细胞核，只有一环状DNA分子（拟核）。以分裂（二分裂）的方式繁殖，分裂速度很快。用革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性菌（革兰氏染液染色后，再脱色处理，细菌仍保留染色液的颜色）和革兰氏阴性菌两大类，区别在细胞壁的成分不同。大肠杆菌是革兰氏阴性（细胞壁薄，有荚膜）、兼性厌氧的肠道杆菌。 2．细菌的分离方法有两种：划线分离法和涂布分离法。是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。划线分离就是用接种环蘸菌液后在含有固体培养基的培养皿平板上划线，在划线的过程中菌液逐渐减少，细菌也逐渐减少，。划线最后，可使细菌间的距离加大。将接种后的固体培养基培养10～20小时后，一个细菌细胞就会繁殖成许多细菌细胞，形成菌落，不会重叠。在斜面上划线，则每个斜面的菌群就是有一个细菌产生的后代。用于基因工程的大肠杆菌的工程菌，可以用划线分离法获得产物表达能力高的菌株。由于工程菌的质粒中通常有抗性基因（如抗氨苄青霉素基因），如在培养基中加入一定量的氨苄青霉素，由于非工程菌的其他杂菌都没有抗性基因，所以在划线后只有存在抗性基因的工程菌能生存下来。 涂布分离时，需要先将培养的菌液稀释，通常稀释到10-5～10-7之间，然后去0.1ml不同稀释度的稀释菌液放在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上进行培养，在适当的稀释度下，可产生相互分开的菌落。通常每个培养皿中有20个以内的单菌落为最合适。将每个菌落分别接种在斜面上扩增培养后，再做功能性实验。 划线分离法，方法简单；涂布分离法，单菌落更易分开，但操作复杂。 3．在培养微生物时，必须进行无菌操作。其首要条件是各种器皿必须是无菌的，各种培养基也必须是无菌的，转移培养基、倒平板、接种、平板划线、平板稀释涂布等操作中的每一步都要做到无菌（防止杂菌污染）。进行恒温培养时，要将培养皿倒置，是因为培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，倒放培养皿会使水蒸气凝结成水滴后，落入培养基的表面并且扩散，菌落中的细菌也会随水扩散，菌落见相互影响，很难在分成单菌落，达不到分离的目的。其培养过程一般包括：培养基配制、灭菌、接种、培养等几步。 4．细菌扩大培养要用LB液体培养基（含有蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、水等物质。通用培养基、常用于做生理学研究和发酵工业），划线分离要用LB固体培养基（常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种保存）。“细菌喜荤，霉菌喜素”，通常细菌培养基要用蛋白胨和酵母提取物来配制，还要加入一定的氯化钠，以维持一定的渗透压；霉菌培养基一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可。尽管培养基的配方各不相同，但其基本成分都一样（五类）。配制过程是：称量、溶化、调PH、分装等几步。 二、课后练习 1．（09调研卷）某生物实验室要进行大肠杆菌的培养和分离及植物组织培养实验。现有以下几种试剂供实验用：A..生长素溶液B.脱落酸溶液C.秋水仙素溶液 D.琼脂 E.细胞分裂素溶液 F.赤霉素溶液 请在标有序号的空白处填空，并将序号及相应答案写在答题纸上： (1)大肠杆菌的培养和分离实验中，先用LB 进行扩大培养，再在LB固体平面培养基上进行 分离。在配制固体培养基时，为了使培养基凝固需用到的上述试剂是 。在培养基上完成接种后，需将培养皿倒置，目的是 ，然后置于恒温箱中培养。 (2)用MS培养基进行植物组织培养实验的基本过程：植物细胞→ 愈伤组织→丛状苗→试管苗。若用成熟花粉培养得到的试管苗 植株。以上过程需要加入上述试剂中的 两种物质刺激，且不同的培养时期这两种物质的比例不相同，当其中的 浓度较高时主要是促使其长芽。愈伤组织中细胞的分裂方式是 ，愈伤组织中的一部分细胞长成根，而另一部分细胞却长成芽，原因是细胞发生了分化，实质是 。 (3)MS培养基和LB培养基配制好后都需要进行 、分装和灭菌处理。 2．2005年诺贝尔生理学或医学奖授予两位澳大利亚的医生马歇尔和沃伦，以表彰他们发现幽门螺杆菌及其在胃炎等病中所起的作用。 （1）1974年沃伦在一份胃粘膜活体标本中发现无数的细菌紧贴着胃粘膜上皮，这种细菌就是幽门螺杆菌，胃粘膜上皮细胞与细菌细胞结构相比主要区别 。