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液相色谱教程 (三)液相色谱实验操作 Waters 中国有限公司培训中心 启动液相色谱仪器的流程 开启HPLC系统各个设备的电源 打开泵、自动进样器、检测器电源，待设备通过自检后，打开计算机，启动色谱管理软件 准备流动相 过滤,脱气 色谱泵排气 用新配制的流动相灌注泵 启动液相色谱仪器的流程 用准备好的流动相平衡色谱系统 可在泵的控制面板上设定流速参数(15×5泵需在软件控制下操作) 系统大约需平衡0.5--1小时方能稳定工作 准备样品 用流动相溶样或重组样品 编制仪器方法,开始实验 液相色谱对流动相的要求 色谱柱对流动相的要求 过滤除去微粒 纯度的要求 超纯水，或用KMnO4处理过的双蒸水 有机溶剂：色谱纯(溶剂中的杂质含量尽可能低)， 并与填料相匹配 缓冲液的pH值，在填料的允许范围(一般在pH2-8)内 缓冲液（盐）的浓度不要太高(≤100mM) 流动相对样品的溶解度 调整有机溶剂和水的比例 最好用流动相溶样 液相色谱对流动相的要求 液相色谱仪器对流动相的要求∶ 与检测器匹配 脱气 避免用含卤素离子的缓冲盐（不锈钢系统） 溶剂的粘度 防止细菌的生长 流动相的脱气 流动相脱气的目的 使色谱泵的输液准确 输液量均匀准确，并且脉动减小 保留时间及色谱峰面积的重现性提高 提高检测的性能 防止气泡引起的尖峰 基线稳定，信噪比增加 溶剂的紫外